产品简介：

超灵敏/超稳定的荧光核酸染料，实验表明在凝胶染色浓度下无致突变性,通过荧光共振能量转移FRET的独特设计改善了同类产品对大片段DNA条带拖尾模糊的现象，带形清晰整齐,迁移率好,定量准确,染色均匀,灵敏度高,稳定性高，Safe Red是一种油性大分子(分子量>1000)。

产品特点：

1. 带形清晰整齐：该核酸染料完全克服了原装国外同类产品对大片段DNA条带弥散的缺点，电泳条带清晰整齐美观。

2. 安全无毒：独特油性大分子使其不能穿透细胞膜进入细胞，Ames-test实验表明，该染料没有EB的致癌性诱变性。

3. 迁移率好：EB小分子很快跑出胶外，所以EB容易导致小DNA片段看不清，我们的大分子SafeRed完全克服这一点。

4. 定量准确：适用于核酸分子大小的确定和定量，EB对小DNA片段定量不准确。

5. 染色均匀：电泳时染色均匀，靠近负极凝胶和靠近正极端的亮度一样。EB会导致胶的整体背景稍微高些，经常出现阴阳背景（胶的背景一部分亮一部分暗）；长时间、长距离的电泳，EB信号强度会相应下降。我们的大分子SafeRed完全克服这一点。

6. 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移率与EB相同，小于SYBRGreenI。

7. 稳定性高：耐热，可加在缓冲液里，100℃溶解凝胶，防止染色剂没充分混匀。适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定。

8. 耐光性强：实验室的日常光线下在棕色冻存管中可以常温放置24个月。

9. 信噪比好：样品荧光信号强，背景信号低，荧光亮度是EB的十倍以上，肉眼可观测到亮度明显比EB强，EB会导致胶的整体背景稍高些，经常出现阴阳背景。

10. 操作简单：与EB用法完全一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

11. 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。

12. 完美兼容：与EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置：标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在300nm紫外光附近可得到最佳激发。

操作步骤：

一．胶染法（推荐方法，用法类似EB）制胶时加入SafeRed核酸染料(染料灵敏，每100mL琼脂糖溶液中加入10ul SafeRed原装液即可)。按常规方法电泳。

1. 实验室材料和试剂：

（1）实验试剂：质粒DNA，DNAmarker，1XTAE电泳缓冲液，1XTBE电泳缓冲液，溴酚蓝指示剂，1%的琼脂糖凝胶。

（2）实验仪器：电泳仪（130v），移液器(0.5~10ul)，凝胶成像仪。

2.实验步骤：

（1）制胶：将0.5g琼脂糖溶于50mL 1X TAE电泳缓冲液中，加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置50℃左右加入5ul的SafeRed凝胶电泳染料，摇匀。

（2）倒胶：将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内，避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端，距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳，切勿晃动。

（3）置胶：待约30分钟左右胶体充分凝固后，缓慢垂直向上拔起点样梳子，切勿用力过猛。（夏季适当延长凝胶时间）

（4）将琼脂糖凝胶放入电泳槽内，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液液面高于凝胶面约1~2mm。

（5）将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本（1ul溴酚蓝与5ulDNA标本混合）加入到点样孔内。

（6）盖上电泳槽盖，开启电源，使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在120~130v之间，一般可选择130V)。

（7）当DNA条带距离点样孔约1~2cm后关闭电源，(约30～40分钟)取出凝胶。

（8）用302nm激发的UV凝胶成像系统观察结果。

注意事项：

1. 此方法染色染料用量相对较少。染料加入胶中可直接使用微波炉加热，制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。

2. 尽管多数国产的DNAmarker浓度较高，经测试我们的SafeRed仍然适用，不需要像国外同类产品稀释Marker一倍后使用！

3. 更换电泳缓冲液，新配置的电泳液效果好！TBE缓冲液比TAE效果好，因为含硼酸盐的试剂导电性能更好。

4. 电泳时电压不宜过高，一般不要超过130V。

5. 对DNA的迁移率和条带分离效果SafeRed与EB相比，完全一样！但是EB会导致胶的整体背景稍微高些，经常出现阴阳背景（胶的背景一部分亮一部分暗）,这个方法可以区分染料是否是EB配置的。

6. SafeRed染料和样品混合后，点样到琼脂糖凝胶中，不推荐这种点样法。

7. 由于SafeRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将SafeRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。SafeRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

8. 如果总是看到条带弥散或分离不理想，为了避免染料可能对DNA迁移的干扰，建议使用电泳后染胶。使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关！如果不立刻测量吸光度，可在每个孔中加入10ul 1％w/vSDS或0.1MHCl，盖好并在室温下避光保存。24小时内不会观察到吸光度变化。

二．泡染法

（1）按照常规方法进行电泳。用于胶回收等高浓度DNA样品强烈推荐泡染法！

（2）用H2O将 SafeRed 10,000×储液稀释约3,300倍到0.1MNaCl溶液中，制成3×染色液。

（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。

（4）用302nm激发的UV凝胶成像系统观察结果。

注意事项：

用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右；3×SafeRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。