提取/检测试剂盒

FBGreen dsDNA Qubit定量检测试剂盒(~PicoGreen)

货号:PMK0877
规格:2000T
价格:4345元
库存:65
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

 在分子生物学的试验过程中,FBGreen dsDNA 定量试剂盒是荧光检测双链 DNA 并进行定量的一种产品,这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的:cDNA 文库的构建;用于亚克隆的  DNA 片段纯化及应用,比如进行 DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。 疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗,比如重组乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。 常规的DNA含量的检测方法是在260nm(A260)处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大,并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分DNA和RNA,而且这种方法不灵敏(5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1)。PicoGreen定量检测方法简单、方便,被多家生物制品厂所选择,成为生物制品残留DNA检测的标准。


所需器材:

• 微型荧光计;便携式荧光仪;1cm石英比色皿

• FBGreen dsDNA 定量检测试剂盒, 1mL 单位量的试剂浓缩液足够 2mL 体积的 200 次测定。

1×TE(10mM Tris 1mM EDTA)pH8.0; 250ug/mL小牛胸腺DNA


试剂制备

FBGreen dsDNA定量试剂是以1mL的浓缩液形式保存在无水的DMSO(二甲基亚砜)中。实验当天,配制2X FBGreen试剂的操作溶液,用1 x TE按1:200的比例稀释浓缩液(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH7.5)。如果要准备足够的操作溶液测定20个样品,可在20mL1 x TE中加入100μL FBGreen dsDNA定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。PicoGreen试剂见光易降解,所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。

溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。

 

操作步骤:

1). 标准品工作液的配制:小牛胸腺嘧啶DNA干粉1mg(Tris,Nacl等浓度已成标准体系),加入1mL双蒸水,配制成1mg∕mL的标准品工作液;

2). 染料工作液的配置:6 uLFBGreen加入1mL TE(注意:用1×TE将FBKGreen稀释200倍,现用现配,注意避光)。

3). 标准品工作液稀释:

(1)母液稀释:取10ul(1mg∕mL)标准品工作液加入到990ul TE溶液中,浓度稀释成10ug∕mL,取10ul(10ug∕mL)标准品工作液加入到990ul TE溶液中,浓度稀释成100ng∕mL;

(2)倍比稀释:取800ul (100ng∕mL)的标准品工作液加入到200ul TE溶液中,浓度达到80ng∕mL(药典规定:荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好, 该法DNA检出限为0.3 ng/ml),取500ul(80ng∕mL)的标准品工作液加入到500ul TE溶液中,浓度稀释到40ng∕mL;依次倍比稀释,配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液;
4).标准曲线的制备:倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100ul混匀,避光室温放置5min。使用便携式荧光仪检测样品的荧光值:将混合后的溶液加入微量比色皿,确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank,测定样品和空白对照的荧光值;用标准品溶液的浓度(ng/ml)对应的荧光强度作直线回归,制备标准曲线。

 

产品优点:

1)该方法可以测定来源于任何表达宿主样品中的双链DNA。

2)可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。

3)远远超出传统紫外A260的检测方法的灵敏度。

4)较高浓度的盐,尿素,乙醇,氯仿,去垢剂,蛋白或琼脂糖对测定无影响。

5)在等摩尔浓度ssDNA和RNA存在的条件下测定dsDNA,其影响很小。


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