产品简介:
Super Green是一种新型无毒核酸染料。这种独特的油性大分子,不易挥发升华、不容易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,且在凝胶染色浓度下没有诱变性,具有使用安全、检测灵敏等特点,可以作为各种核酸电泳的染色剂,适用于各种片段大小染色。与标准凝胶成像系统和可见光激发的凝胶观察装置完美兼容,适用于紫外凝胶成像系统或蓝色可见光激发的凝胶观察装置
产品特点:
1. 相对安全:尽管可以穿透细胞膜进入细胞内,属于花菁染料,使用相对安全,实验显示在工作浓度(凝胶染色浓度)下没有发现致突变性,可以代替致癌物溴化乙锭EB作为各种核酸电泳的染色剂。
2. 高灵敏:紫外凝胶透射仪下灵敏度高 EB 染色法 5-10 倍,可见光透射仪下的灵敏度比 EB 染色法高20~30 倍。
3. 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
4. 操作简单:无须脱色或冲洗,即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察。
5. 适用范围广:可适用于多种电泳分析,如琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。
6. 使用方便:不影响其它修饰酶作用(如:Taq 酶、内切酶、T4 连接酶、反转录酶等)。
操作步骤:
1.胶染法(用法同EB)
1) 制胶时加入 Super Green I 核酸染料。冷却胶到 50℃左右,每 100ml 胶中加入1-3µl Sybr Green I 核酸染料。
2) 按照常规方法进行电泳即可。
3) 用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:此方法染色能准确确定片段分子量且用量较少。1ml 染料可以做 1000 块10 ml 胶,每块胶点 50 个样,可做 50000 次。
2.点染法
1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2) 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的Super Green I 稀释100倍,即为Super Green I 工作液。Super Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。
3) 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4) 样品染色:向分析样品中加入Super Green I工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使Super Green I与样品中DNA充分结合。Super Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。
5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μLSuper Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使Super Green I 与DNA充分结合。
6) 上样、电泳:按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。通常点一个样加入 1µL 即 可,可以使用 10000 次, 但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker 对比),建议使用胶染法。
3.泡染法
1) 按照常规方法进行制胶,其中不含任何染料。
2) 用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE, TBE),按照 1﹕1000 的比例稀释 Sybr Green I
3) 核酸染料,混匀,制成染色溶液。
4) 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。 室温振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆 盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
5) 用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:用泡染方法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中用量最大的。
注意事项:
1.Super Green核酸染料样品点染方法中,电泳不要超过 2 小时,以免核酸染料从 DNA/RNA 上分离出来,产生弥散状条带。
2.用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(和 Marker 对比),建议用胶染法和泡染法。
3.常规用酒精沉淀核酸过程中,Super Green I 核酸染料可以全部从核酸上去掉。
4.DNA电泳请选择 SuperGreen I 染料,RNA 电泳请选择Super Green II染料,两种染料不通用。
5.Super Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染 色等使用过程中用聚丙烯类容器。
6.可以加Orange Red 作为标记pH值在7.5-8.3之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50度。