产品简介:
Super Green(可替代Sybr Green)用DMSO溶解,因DMSO的熔点是18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。
产品特点:
1、无毒性:属花箐类染料,容易生物降解,无致癌毒性。
2、高敏性:至少可检出20pg ssDNA或RNA,高于EB染色法25~100倍。
3、信噪比高:样品荧光信号强,无背景信号。
4、操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也 只需30 分钟且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。
5、适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等;可用于 ssDNA 或 RNA 染色。
6、使用方便:对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶 等)没有抑制作用。
7、经济:价格比银染便宜。
操作步骤:
一、胶染法(用法同EB)(推荐方法)
1、制胶时加入SYBR Green II 核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL SYBR Green II 10,000× 储液,以此比例类推。
2、按照常规方法进行电泳。 注意事项:此方法染色可以准确确定核酸片段分子量,染料用量相对较少。1mL染料大约可 以做300块 100mL的胶。 由于SYBR Green II热稳定性较差,不能在热的胶溶液中直接添加,需要等待溶液冷却至50℃ 左右才能添加。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。
二、泡染法
1、按照常规方法进行电泳。
2、用pH 7.0~8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000﹕1的比例稀释SYBR Green II 10,000× 储液,混匀,制成1× 染色液。
3、将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的1× 染色液浸没 凝胶。用铝箔等盖住容器使染料避光。
4、室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接 在玻璃平皿上染色,将配好的1× 染色液轻轻地倒在胶板上,让其均匀地覆盖整个胶板,并 染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量较多。