产品简介:
Super Fluor 系列(可替代Alexa Fluor 系列)荧光探针,具有更强的荧光强度,更广的pH应用范围(pH 4~10), 更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。
标记抗体:
1) 蛋白溶解:用0.1 M NaHCO3溶解至终浓度为2mg/mL
将1ml 去离子水加入84mgNaHCO3瓶中,配成1M 的碳酸氢钠溶液。振荡或吹打至完全溶解。该溶液pH约8.3,2~6℃保存可用2星期;若抗体是溶液,将抗体稀释至2mg/mL,再加入1/10 体积的上述碳酸氢钠溶液;若抗体是冻干粉,将1M 碳酸氢钠溶液用10 倍去离子水稀释成0.1M 后,用其将抗体溶成2mg/mL的溶液;
2)染料溶解:活化Super Flour SE染料固体粉末从冰箱放入干燥器中慢慢升至常温后,用无水DMSO将染料配置浓度为1 mg/mL。
3)标记:在1mL蛋白溶液中缓慢加入适量染料溶液,(蛋白:染料摩尔比=1:20~50;质量比可在以下范围内优化10~200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗体)。同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。也可以直接将蛋白溶液直接加入染料的固体粉末的试剂瓶中,同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。
4)纯化:用透析法或者葡聚糖Sephadex纯化产品后,产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM叠氮化钠溶液中,-20℃避光储存。
5)贮存:标记好的蛋白贮存于2~6℃,避光。若纯化的蛋白偶联物浓度小于1mg/mL,加入BSA 或其他稳定蛋白1~10mg/ml。在2mM 叠氮钠存在的情况下,2~6 度可保存几个月。保存更长时间,则需分装后-20℃保存。避免反复冻融,避光保存。
计算标记比例F/P值:
对于IgG 等大多数抗体来说,摩尔吸光系数为203000,F/P值在4~9 之间是最合适。
1)用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白,在1cm比色皿中测定280nm和555nm的光吸收;
2)计算样品中的蛋白浓度:蛋白摩尔浓度=(A280-(A555×0.08))×稀释倍数/203000
3)计算标记比例:每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A555×稀释倍数/(150000×蛋白摩尔浓度)
注意事项:
1. 其水溶液现配现用,不能储存;
2. 任何溶解后的染料最好立即使用;
3. 无水的DMSO溶液-20°C保存最多2个星期。