产品简介:
DiR染料是亲脂性的近红外花菁荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。18个碳的长链插入细胞膜中从而对细胞进行染色, 而细胞间的染料转移可以忽略不计。DiR的发射的是近红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。
操作步骤(从脾脏分离的T细胞用DiR和IV荧光染色。注射(5x106个细胞/小鼠)到Nu/Nu小鼠)
将25 mg溶解在3 mL乙醇中制备DiR原液。用5 mL PBS稀释199 mL原液,制备320微克/毫升的工作溶液。将从脾脏分离的T细胞用320微克/毫升的DiR孵育。培养30分钟后,将细胞在4℃下以1000 rpm旋转3分钟,产生蓝色颗粒。细胞在PBS中洗涤两次并静脉注射(5x106个细胞/小鼠)。对照组在PBS中注射5x106个细胞/小鼠。小鼠分别于注射后10分钟、1小时、6小时和24小时进行IVIS光谱成像。理想的DiR成像滤波器组是710 nm激发和760 nm发射。在所有时间点对小鼠进行背侧和腹侧成像。注射24小时后,取脑、骨、脾、肝、肺和肾进行体外成像。非侵入性体内成像实时显示了注射的T细胞向肝脏和脾脏的归巢过程,这一点得到了体外成像的证实。