产品简介：
Fluo-2 最早是由 Roger Tsien 博士发明的钙离子指示剂 Fluo 系列之一，目前，Fluo-3 和Fluo-4 已成熟商品化。然而，Fluo-2 在细胞内比 Fluo-4 要更明亮，主要可能是由于大部分细胞对 FLuo-2 的加载能力要高于 FLuo-4。
Fluo-3 成像涉及到钙离子信号通路的多个方面，Fluo-3 经常应用在流式细胞术上，如螯合剂光活化、第二信使、神经递质以及细胞水平的药理筛选。Fluo-3 在这些应用里之所以能大量运用主要是由于其几个重要特性：Fluo-3 可以被氩离子激光器 488nm 激发，并在与 Ca2+结合后，发射荧光很明亮的荧光信号。
Fluo-3 AM 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM 的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3 AM 进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3 可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为 506nm，最大发射波长为 526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为 488nm 左右，发射波长为 525-530nm。
操作步骤：
加载细胞说明
加载细胞，建议使用膜透性的 AM 酯类形式的探针，如下操作建议仅供参考。
1. 取适量 Fluo-3 AM 母液，用 PBS 稀释至 1~5μM 的工作液浓度，加入非离子型去污剂 Pluronic F-127 可以协助非极性的 AM 酯在水溶液中的扩散，确保 Pluronic F-127 在加载到细胞 中的工作浓度是 0.02%（1:1000 稀释原液）。 注：工作液须即用即配，请勿反复冻融。
2. 对于待检测的培养细胞，去除培养液，用 PBS 或 HBSS 洗三遍。 注：因为培养液中的血清含有酯酶会导致 Fluo-3 AM 分解为 Fluo-3，而酚红会导致荧光背景增强。
3. 加入 Fluo-3 AM 工作液，溶液量以能充分覆盖细胞为准。
4. 20℃-37℃孵育 10-60 分钟进行荧光探针装载。 注：如果是首次实验不能确定孵育温度和时间，建议先尝试 37℃孵育 30 分钟，观察荧光效果。如果细胞死 亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。
5. 随后用PBS或HBSS洗涤3次，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM 在细胞内完全转变成 Fluo-3。
6. 如有需要，可以使用适当药物来刺激细胞。
7. 用激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、荧光分光光度计或流式细胞仪等荧光检测仪器检 测 Fluo-3 的荧光，以确定细胞内钙离子浓度的变化。
注：标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。
注意事项：
1、 本 Fluo-3 AM 在 4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以 20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
2、 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3、 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
