产品简介：
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。
操作步骤：
1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注意：未使用的储存液保存在-20°C，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 µM的工作液。
注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2. 悬浮细胞染色
（1）悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。
（2）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
选择合适的DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器。
5. 流式细胞仪的检测
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
