产品简介
谷胱甘肽是甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸组成的天然三肽。在红细胞中，还原型谷胱甘肽是维持血红蛋白处于还原状态的关键，保护细胞免受氧化损伤。 GSH是细胞中最重要的抗氧化剂巯基化合物，在细胞抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜转运中起重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒提供了一种简单的检测方法，用于检测各种生物样本中GSH的含量。原理是DTNB与还原型谷胱甘肽反应生成黄色产物。在412nm处有最大光吸收，与样品中还原型谷胱甘肽的浓度成正比。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃ |
反应缓冲液 | 10mL | 20mL | 4℃ |
显色物 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃避光保存 |
标准品 | 粉剂×1支 | 粉剂×1支 | 4℃避光保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测412nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机、去离子水、匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
反应缓冲液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
显色物：使用前95T加入5mL去离子水，48T加2.5mL去离子水溶解；4℃避光保存。
标准品制备：
稀释提取液：按1:10的比例用去离子水稀释提取液，如：取200 µL 提取液 加入1,800 µL去离子水。
50mM GSH标准品：每管GSH标准品含15.4mg GSH，使用时加1mL稀释后的提取液得50mM GSH标准品，4℃避光保存。
1000µM GSH标准品：取20μL 50mM GSH标准品用 980μL稀释后的提取液稀释。
标准曲线设置： 使用1000µM GSH标准品，按照下表所示，进一步稀释标准品：
标准品体积 (µL) | 稀释后的提取液体积 (µL) | 标准品浓度(µM) | |
Std.1 | 200µL 1000µM | 0 | 1000 |
Std.2 | 100µL of Std.1（1000µM） | 100 | 500 |
Std.3 | 100µL of Std.2 （500µM） | 100 | 250 |
Std.4 | 100µL of Std.3（250µM） | 100 | 125 |
Std.5 | 100µL of Std.4（125µM） | 100 | 62.5 |
Std.6 | 100µL of Std.5（62.5µM） | 100 | 31.25 |
Std.7 | 100µL of Std.6（31.25µM） | 100 | 15.6 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在4 h之内使用。
样本制备
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。
动物组织：称取0.1g组织样本，加入1mL预冷的提取液，快速冰上匀浆。匀浆后的样本，8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
植物组织：称取0.1g植物组织剪碎，加入1mL预冷的提取液，快速冰上匀浆。匀浆后的样本冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次）。超声后的样本，8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
血清或血浆：按常规方法收集血清，加入等体积的提取液，4℃，8,000g离心10min，取上清液，置冰上待测。将收集的抗凝血于4℃，600g离心10min，30min内吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的提取液，4℃，8,000g离心10min，取上清液，置冰上待测。
血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10min，弃去上层血浆，用PBS重悬，收集5×106个血细胞，用冷PBS清洗2次（用PBS重悬血细胞，4℃ 600g离心10min），加入1mL预冷的提取液，冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次）。超声后的样本，8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
细胞或细菌：收集5×106个细胞或细菌，首先用冷PBS清洗细胞2次（用PBS重悬细胞，4℃ 600g 离心10min），加入1mL预冷的提取液重悬细胞或细菌，冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次）。超声后的样本，8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
实验步骤
1．酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2．在96孔板或微量玻璃比色皿中按照如下方式加样：
试剂（µL） | 空白孔 | 标准孔 | 测定孔 |
样本 | 0 | 0 | 20 |
稀释后的提取液 | 20 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 20 | 0 |
反应缓冲液 | 140 | 140 | 140 |
显色物 | 40 | 40 | 40 |
3．充分混匀，37℃避光孵育10min,记录10min时的吸光度A空、A标、A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空（空白管只需做1次）。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA测大于1.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以最终稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制
以标准品浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
2. GSH含量的计算
将样本的ΔA测代入方程得到y值（1µM=1nmol/mL）。
（1）按样本鲜重计算
GSH（nmol/g 鲜重）=y×V样÷(W×V样÷V样总)×n=y÷W×n
（2）按液体样本体积计算
GSH（nmol/mL）=2×y×V样÷V样×n=2y×n
（3）按细胞数目计算
GSH（nmol/104 cells）=y×V样÷(500×V样÷V样总)×n=y÷500×n=0.002×y×n
V样：加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，0.1g；V样总：加入提取液体积，1mL；n：样本进一步稀释的稀释倍数；2：液体样本制备时的稀释倍数，加入等体积的提取液即稀释2倍；500：细胞数量，500万。
V样：加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，0.1g；V样总：加入提取液体积，1mL；n：样本稀释倍数；2：液体样本制备时的稀释倍数，加入等体积的提取液即稀释2倍；500：细胞数量，500万。
结果展示
典型标准曲线
、、
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
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