产品简介
甘油三酯（Triglyceride, TG）是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。血清TG是一项重要的临床血脂常规测定指标。本试剂盒可检测血清（浆）、动植物组织、细胞、细胞上清、细菌等样本中甘油三酯（TG）含量，其原理是用异丙醇抽提样本中TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在420nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 60mL | 120mL | 4℃保存 |
试剂一 | 2mL | 4mL | 4℃保存 |
试剂二 | 3mL | 6mL | 4℃保存 |
试剂三 | 1mL | 2mL | 4℃避光保存 |
试剂四 | 3mL | 6mL | 4℃避光保存 |
试剂五 | 3mL | 6mL | 4℃避光保存 |
标准品 | 0.1mL | 0.1mL | 4℃避光保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测420nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂四：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂五：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
标准品：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
样本制备
动物组织：称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆，8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL提取液冰浴匀浆后，将匀浆液冰浴超声波破碎5min（功率20％或200 W，超声3s，间隔7s，重复30次），8,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL 提取液，冰浴超声波破碎细胞或细菌5min（功率20％或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后8,000 g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
血清（浆）、细胞上清等液体样本：直接测定。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用Bradford法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到420nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2. 水浴锅预热到65℃。
3. 甘油三酯的提取（下述操作在EP管中操作）：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | |
去离子水 | 40 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 40 | 0 |
样本上清 | 0 | 0 | 40 |
提取液 | 125 | 125 | 125 |
试剂一 | 25 | 25 | 25 |
将已处理好的样本上清、标准品、空白对照（去离子水）按照上表分别放于提前标注好的EP管中，加提取液后充分混匀，再加试剂一，剧烈振荡30s，静置5min后再剧烈震荡30s，如此反复3次，常温静置一定时间（约5min），待分层后，取上层溶液15μL，置于新的EP管中。
注意：加试剂一后需剧烈震荡，使样本中甘油三酯得到充分提取。
4. 甘油三酯含量的测定：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | |
上层溶液 | 15 | 15 | 15 |
试剂二 | 50 | 50 | 50 |
试剂三 | 15 | 15 | 15 |
充分混匀，65℃水浴3min | |||
试剂四 | 50 | 50 | 50 |
试剂五 | 50 | 50 | 50 |
充分混匀，65℃水浴15min | |||
水浴后，取出EP管，冷却至室温后，吸取100 μL至96孔板或微量玻璃比色皿测定420nm处吸光度，空白管记为A空，标准管记为A标、测定管记为A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。
注意：空白管和标准管只需测定1次。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果A测大于1.0，样本可用提取液进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
结果计算
1．液体样本中甘油三酯含量：
TG含量(mg/mL)=C标准品×ΔA测÷ΔA标=10×ΔA测÷ΔA标
2．动（植）物组织中甘油三酯含量：
（1）按样本蛋白浓度计算：
TG含量(mg/mg prot)= C标准品×V样×ΔA测÷ΔA标÷(Cpr×V样)=10×ΔA测÷ΔA标÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
TG含量(mg/g 鲜重)=C标准品×V样×ΔA测÷ΔA标÷(V样÷V样总×W)=10×ΔA测÷ΔA标÷W
3．细胞、细菌中甘油三酯含量：
TG含量(mg/104 Cells)=C标准品×V样×ΔA测÷ΔA标÷(V样÷V样总×500)=0.02×ΔA测÷ΔA标
C标准品：10mg/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；V样：加入样本体积，0.04mL；V样总：样品制备加入提取液的体积，1mL；500：细胞或细菌总数，500万。
