脂肪酸系列

甘油三酯(TG)检测试剂盒(微量法)

货号:PMK1142
规格:48T/96T
价格:570元/950元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

甘油三酯(Triglyceride, TG)是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。血清TG是一项重要的临床血脂常规测定指标。试剂盒可检测血清(浆)、动植物组织、细胞、细胞上清、细菌等样本中甘油三酯(TG)含量,其原理是用异丙醇抽提样本中TG,KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸,过碘酸氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质,在420nm有特征吸收峰,其颜色的深浅与TG含量成正比。

 

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

60mL

120mL

4℃保存

试剂一

2mL

4mL

4℃保存

试剂二

3mL

6mL

4℃保存

试剂三

1mL

2mL

4℃避光保存

试剂四

3mL

6mL

4℃避光保存

试剂五

3mL

6mL

4℃避光保存

标准品

0.1mL

0.1mL

4℃避光保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测420nm处的吸光度)及水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

制冰机、低温离心机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

提取液:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂二:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂三:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

试剂四:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

试剂五:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

标准品:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

 

样本制备

动物组织:称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴匀浆,8,000g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

植物组织:称取约0.1g样本,加入1mL提取液冰浴匀浆将匀浆液冰浴超声波破碎5min(功率20%或200 W,超声3s,间隔7s,重复30次8,000g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

细胞或细菌:收集500万细胞或细菌到离心管内,用冷PBS清洗细胞,离心后弃上清,加入1mL 提取液,冰浴超声波破碎细胞或细菌5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次),然后8,000 g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

血清(浆)、细胞上清等液体样本:直接测定。

注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。如需测定蛋白浓度,推荐使用Bradford法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

 

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上,调节波长到420nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2. 水浴锅预热到65℃。

3. 甘油三酯的提取(下述操作在EP管中操作):


空白管(μL)

标准管(μL)

测定管(μL)

去离子水

40

0

0

标准品

0

40

0

样本上清

0

0

40

提取液

125

125

125

试剂一

25

25

25

将已处理好的样本上清、标准品、空白对照(去离子水)按照上表分别放于提前标注好的EP管中,加提取液后充分混匀,再加试剂一剧烈振荡30s,静置5min后再剧烈震荡30s,如此反复3次,常温静置一定时间(约5min),待分层后,取上层溶液15μL,置于新的EP管中。

注意:加试剂一后需剧烈震荡,使样本中甘油三酯得到充分提取。

4. 甘油三酯含量的测定:


空白管(μL)

标准管(μL)

测定管(μL)

上层溶液

15

15

15

试剂二

50

50

50

试剂三

15

15

15

充分混匀,65℃水浴3min

试剂四

50

50

50

试剂五

50

50

50

充分混匀,65℃水浴15min

水浴后,取出EP管,冷却至室温后,吸取100 μL至96孔板或微量玻璃比色皿测定420nm处吸光度,空白管记为A,标准管记为A、测定管记为A计算ΔA=A-AΔA=A-A

注意:空白管和标准管只需测定1次。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果A大于1.0,样本可用提取液进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

 

 

结果计算

1.液体样本中甘油三酯含量:

TG含量(mg/mL)=C标准品×ΔA÷ΔA=10×ΔA÷ΔA

2.动(植)物组织中甘油三酯含量:

1)按样本蛋白浓度计算:

TG含量(mg/mg prot)= C标准品×V×ΔA÷ΔA÷(Cpr×V)=10×ΔA÷ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

TG含量(mg/g 鲜重)=C标准品×V×ΔA÷ΔA÷(V÷V样总×W)=10×ΔA÷ΔA÷W

3.细胞、细菌中甘油三酯含量:

TG含量(mg/104 Cells)=C标准品×V×ΔA÷ΔA÷(V÷V样总×500)=0.02×ΔA÷ΔA

C标准品10mg/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本鲜重,g;V:加入样本体积,0.04mL;V样总:样品制备加入提取液的体积,1mL;500:细胞或细菌总数,500万。


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