脂肪酸系列

高密度脂蛋白(HDL-C)检测试剂盒(微量法)

货号:PMK1151
规格:48T/96T
价格:350元/580元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

高密度脂蛋白为血清蛋白之一,主要由肝脏合成,运载周围组织中的胆固醇,再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出,是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白,是冠心病的保护因子,俗称“血管清道夫”,对冠心病的临床诊断是一个重要的参考指标。试剂盒可检测生物体内HDL-C含量。其原理是:用沉淀剂分离血清中的高密度脂蛋白胆固醇,利用胆固醇酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-胆甾烯酮和 H2O2;再利用过氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物;在500 nm有特征吸收峰。

 

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

10mL

20mL

4保存

试剂一

7.5mL

15mL

4避光保存

试剂二

1

1

-20避光保存


试剂三

5mL

10mL

4保存


标准品

0.25mL

0.5mL

-20避光保存


标准品稀释液

5mL

10mL

4保存

自备耗材

酶标仪可见分光光度计(能测500nm处的吸光度)

恒温箱、制冰机、低温离心机

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

试剂准备

提取液:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

试剂三:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

标准品稀释液:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂二临用前96T加入5mL 试剂三48T加入2.5mL 试剂三充分混匀待用。用不完的试剂可4保存一周或分装后-20保存,禁止反复冻融。

标准品:含 5mmol/L 胆固醇标准品;-20避光保存。

工作液的配制:每孔配制200µL工作液:吸取50µL溶解后的试剂二150µL 试剂一。工作液需现配现用,根据需要测定的样本数按比例配制。

标准曲线设置:按下表所示,用标准品稀释液5mmol/L 胆固醇标准品稀释为5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0 mmol/L 的标准溶液。


标准品体积

标准品稀释液体积(µL)

标准品浓度(mmol/L

Std.1

100µL 5mmol/L

0

5

Std.2

50µL of Std.1 (5mmol/L)

50

2.5

Std.3

50µL of Std.2 (2.5mmol/L)

50

1.25

Std.4

50µL of Std.3 (1.25mmol/L)

50

0.625

Std.5

50µL of Std.4 (0.625mmol/L)

50

0.313

Std.6

50µL of Std.5 (0.313mmol/L)

50

0.156

Std.7

50µL of Std.6 (0.156mmol/L)

50

0.078

Std.8

0

100

0

注意:每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

取血后3小时内分离血清,让样品在室温下凝结30 min,然后1,000 g离心15 min,取上层血清立即测定或分装-80保存,避免反复冻融。将血清样品与提取液按照 1:1 的比例充分混匀,25静置 15 min,2,000 g离心15 min,取上清置于冰上待测。

注意:推荐使用新鲜血清样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。

 

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上,调节波长到500nm,可见分光光度计去离子水调零恒温箱预热到37℃。

2. 样本测定(在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂):


标准(μL)

测定(μL)

不同浓度标准品

20

0

样本

0

20

工作液

200

200

3. 混匀,37℃静置 30min,测定 500nm 处吸光值A。

 

结果计算

1. 标准曲线的绘制

所有孔吸光值 A减去零浓度(Std.8)的吸光值得ΔA。

以标准液浓度为y轴,ΔA标准x轴,绘制标准曲线(浓度为y轴更方便计算结果)。将ΔA测定带入方程得到y值(mmol/L)。

2. 高密度脂蛋白(HDL-C)含量计算

HDL-C含量(mmol/L)= 2×y

其中,2:样本制备过程中的稀释倍数=(1+1)/1=2

结果展示

典型标准曲线-数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线

QQ浏览器截图20230627103357

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