产品简介
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。本试剂盒可检测各种生物样本中还原糖含量，其原理是在碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸能够被还原糖还原生成棕红色的氨基化合物，在540nm 有特征吸收峰，在一定的浓度范围内，还原糖含量与540nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可计算出样品中还原糖的含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
DNS试剂 | 10mL | 20mL | 室温避光保存 |
标准品 | 1 | 1 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测540nm处的吸光度）以及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头
离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
DNS试剂：常温保存，若有黄色晶体析出，需 90℃加热溶解后再用。
标准品：含10 mg无水葡萄糖，临用前加入1mL去离子水溶解得10 mg/mL标准品。溶解后的标准品可4℃保存1个月或-20℃长期保存。
标准曲线设置：按下表所示，用去离子水将10mg/mL标准品稀释为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156 mg/mL 的标准溶液。
标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（mg/mL） | |
标准品1 | 40µL 10mg/mL | 360 | 1 |
标准品2 | 200µL of 标准品1 (1mg/mL) | 200 | 0.5 |
标准品3 | 200µL of 标准品2 (0.5mg/mL) | 200 | 0.25 |
标准品4 | 200µL of 标准品3 (0.25mg/mL) | 200 | 0.125 |
标准品5 | 200µL of 标准品4 (0.125mg/mL) | 200 | 0.0625 |
标准品6 | 200µL of 标准品5 (0.0625mg/mL) | 200 | 0.0313 |
标准品7 | 200µL of 标准品6 (0.0313mg/mL) | 200 | 0.0156 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
植物或动物组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL 提取液，匀浆，转移到有盖离心管中（盖紧盖子防止加热时水分蒸发），80℃水浴40min，每5min振摇混匀1次， 8,000g， 25℃离心10min，取上清液待测。
细菌或细胞：收集5×106个细菌或细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞或细菌，离心后弃上清，加入1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到有盖离心管中（盖紧盖子防止加热时水分蒸发），80℃水浴40min，每5min振摇混匀1次， 8,000g， 25℃离心10min，取上清液待测。
血清（浆）等液体样本：取0.1mL 血清（浆）到有盖离心管中，加提取液 0.9mL，充分混匀；盖紧盖子防止加热时水分蒸发，80℃水浴40min，每5min振摇混匀1次，8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表：
空白管（µL） | 标准管（µL） | 测定管（µL） | |
样本 | 0 | 0 | 75 |
标准品 | 0 | 75 | 0 |
去离子水 | 75 | 0 | 0 |
DNS试剂 | 150 | 150 | 150 |
混匀，沸水浴加热5min（盖紧，防止水分蒸发），取出后立即冷却至室温。取150μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，540nm波长处测定吸光值。计算 ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白 | |||
注意：空白和标准曲线只需测定一次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA测大于2.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1．标准曲线的绘制：
以标准品浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将 ΔA测定带入方程计算出y 值。
2. 样本还原糖含量计算
1）按样本质量计算：
还原糖含量(mg/g)=y×V样÷（W×V样÷V样总）×n=y÷W×n
2) 按细菌或细胞数量计算：
还原糖含量（mg/104cells）= y×V样÷(500×V样÷V样总)×n=y÷500×n=0.002×y×n
3) 按血清（浆）体积计算：
还原糖含量（mg/mL）=y×V样÷（V液×V样÷V样总）×n=10×y×n
V样：加入样本体积，0.075mL；V样总：样本总体积，1mL；W：样本质量，0.1g；500：细菌或细胞总数，500万；V液：液体样本体积，0.1mL；n：稀释倍数。
结果展示
典型标准曲线
