产品简介
葡萄糖（C6H12O6, FW:180.16）是一种主要的生物燃料源，用于产生通用的能量分子ATP。葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。由于葡萄糖在代谢中的重要性，葡萄糖水平是许多代谢紊乱的关键诊断参数。葡萄糖水平异常与几种代谢功能异常有关，如低血糖、高血糖和糖尿病。本试剂盒可检测各种生物样本中的葡萄糖含量，其原理是葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林和酚缩合成红色醌类化合物，其最大吸收峰在 505nm，在一定的浓度范围内葡萄糖含量与505nm吸光度成线性关系，根据标准曲线即可计算出样品中葡萄糖的含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 5mL | 10mL | 4℃避光保存 |
试剂二 | 5mL | 10mL | 4℃避光保存 |
标准品 | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测505nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机
去离子水、PBS
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
混合试剂：使用前将试剂一和试剂二等体积混合，按需求配置。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将 4mmol/L 标准品稀释为 4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L 的标准溶液。
标准品体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（mmol/L） | |
Std.1 | 200 µL 4 mmol/L | 0 | 4 |
Std.2 | 100 µL of Std.1 (4 mmol/L) | 100 | 2 |
Std.3 | 100 µL of Std.2 (2 mmol/L) | 100 | 1 |
Std.4 | 100 µL of Std.3 (1 mmol/L) | 100 | 0.5 |
Std.5 | 100 µL of Std.4 (0.5 mmol/L) | 100 | 0.25 |
Std.6 | 100 µL of Std.5 (0.25 mmol/L) | 100 | 0.125 |
Std.7 | 100 µL of Std.6 (0.125 mmol/L) | 100 | 0.0625 |
样本制备
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
动植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL去离子水匀浆，95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL去离子水，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），95℃水浴10分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
血清（浆）:直接测定，根据预实验确定稀释倍数。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30 min以上，调节波长到505nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定：在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂
空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | |
样本 | 0 | 0 | 20 | 20 |
标准液 | 0 | 20 | 0 | 0 |
去离子水 | 20 | 0 | 0 | 180 |
混合试剂 | 180 | 180 | 180 | 0 |
3. 混匀，置于37℃保温15min后于505nm处读取吸光值；计算测定管ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。
注意：1.空白孔只需测一次；对照孔是为了扣除样本本身的颜色，如果样本没有明显颜色可不设置对照管，计算ΔA测定=A测定-A空白。
2.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA测大于1.5，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1．标准曲线的绘制：
以标准液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
2．葡萄糖含量的计算：
将ΔA测定带入方程计算出y（mmol/L即µmol/mL）。
（1）按样本鲜重计算
葡萄糖含量（µmol/g 鲜重）=y×V样÷(W×V样÷V样总)×n=y÷W×n
（2）按细胞数目计算
葡萄糖含量（µmol/104cells）=y×V样÷(细胞数量×V样÷V样总)×n=y÷500×n=0.002×y×n
（3）按液体样本体积计算
葡萄糖含量（µmol/mL）=y×V样÷V样×n=y×n
V样：加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：提取时加入去离子水体积，1mL；n：样本稀释倍数；500：细胞数量，500万。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
