产品简介
糖原是由葡萄糖构成的高分子多糖，是糖主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式，在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸，随血液循环到肝脏，通过糖异生转变为肝糖原和葡萄糖。本试剂盒可检测动物组织、细菌和细胞样本中糖原含量，其原理利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下与蒽酮显色剂形成在620nm处有特征吸收峰的蓝色化合物，在一定的浓度范围内，糖原含量与620nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可计算出样品中糖原的含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
显色物 | 1 | 1 | 4℃避光保存 |
标准品 | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测620nm处的吸光度）
水浴锅、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水，浓硫酸
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
显色物：48T先加3mL去离子水溶解粉末，然后缓慢加入12mL浓硫酸；96T先加6mL去离子水溶解粉末，然后缓慢加入24mL浓硫酸，充分溶解混匀后使用。4℃避光保存，有效期为一周。
标准品：1mg/mL；4℃保存。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将 1mg/mL 标准品稀释为 0.25、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 mg/mL 的标准溶液。
标准品体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（mg/mL） | |
Std.1 | 100µL 1mg/mL | 300 | 0.25 |
Std.2 | 160µL of Std.1 | 240 | 0.1 |
Std.3 | 200µL of Std.2 | 200 | 0.05 |
Std.4 | 200µL of Std.3 | 200 | 0.025 |
Std.5 | 200µL of Std.4 | 200 | 0.0125 |
Std.6 | 200µL of Std.5 | 200 | 0.00625 |
Std.7 | 200µL of Std.6 | 200 | 0.003125 |
样本制备
注意：
1. 动物组织：称取 0.1g 样本剪碎，置于10mL试管中，加入0.75mL提取液，置于沸水浴中煮沸20min（塞紧试管塞，防止水分蒸发），每5min 振摇试管1次，充分混匀。待组织全部溶解后，取出试管冷却后去离子水定容到5mL，混匀，8,000g，25℃ 离心10min，取上清液待测。
2. 细胞或细菌：收集500万细菌或细胞到EP管内，离心后弃上清，加入0.75mL提取液超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移至10mL 试管中，置于沸水浴中煮沸20min（塞紧试管塞，防止水分蒸发），每5min振摇试管1次，充分混匀。取出试管冷却后去离子水定容到5mL，混匀，8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到620nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定：在EP管中依次加入下列试剂：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | |
样本 | 0 | 0 | 60 |
标准液 | 0 | 60 | 0 |
去离子水 | 60 | 0 | 0 |
显色物 | 240 | 240 | 240 |
3. 混匀，置于95℃水浴 10min（盖紧，防止水分蒸发），冷却，取200uL 转移至96孔板中，620nm 波长处测定吸光值，分别记为A空白，A标准，A测定，计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。
注意：1. 提取液具有腐蚀性，显色物 具有一定的毒性，操作时请做好防护措施。
2. 实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA测定大于1.5，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
结果计算
1． 标准曲线的绘制：
以标准液浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴便于计算结果）。将 ΔA测定代x计算出 y（mg/mL）。
2．糖原含量计算：
（1）按照样本质量计算：
糖原（mg/g）=1.11×(y×V样)÷(W×V样÷V样总)×n=5.55×y÷W×n
（2）按照细菌或细胞数量计算：
糖原（mg/104 cells）=1.11×(y×V样)÷(500×V样÷V样总)×n=5.55×y÷500×n=0.0111×y×n
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即100μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于 111μg 糖原用蒽酮试剂所显之色；V样：加入反应体系中待测样本体积，0.06 mL；W：样本质量，g；V样总：样本总体积，5mL；n：稀释倍数；500：细菌或细胞总数，500万。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
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