产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 1 | 1 | 4℃避光保存 |
试剂二 | 5mL | 10mL | 4℃保存 |
标准品 | 10mg | 10mg | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测620nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头
制冰机，离心机，水浴锅或金属浴
去离子水，浓硫酸
匀浆器
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
工作液：在试剂一中加入试剂二（48T加1.25mL，96T加2.5mL），待充分溶解后备用。如较难溶解，可加热搅拌。剩余的试剂，置于4℃的条件下可保存一周。
标准品：临用前向10mg的标准品中加入1mL去离子水溶解，配制成10mg/mL标准溶液备用，4℃可保存1周。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将10mg/mL标准溶液稀释为 0.5、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 mg/mL的标准溶液。
标准品体积 | 去离子水体积 | 浓度 | |
Std.1 | 50µL 10mg/mL | 950µL | 0.5mg/mL |
Std.2 | 80µL of Std.1 (0.5mg/mL) | 120µL | 0.2mg/mL |
Std.3 | 100µL of Std.2 (0.2mg/mL) | 100µL | 0.1mg/mL |
Std.4 | 100µL of Std.3 (0.1mg/mL) | 100µL | 0.05mg/mL |
Std.5 | 100µL of Std.4 (0.05mg/mL) | 100µL | 0.025mg/mL |
Std.6 | 100µL of Std.5 (0.025mg/mL) | 100µL | 0.0125mg/mL |
样本制备
植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL去离子水匀浆或研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，95℃水浴或金属浴10min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8,000g，25℃离心10min，取上清液于10mL试管中，用蒸馏水定容至10mL，摇匀备用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到620nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表（在EP管中）：
空白管（μL） | 测定管（μL） | 标准管（μL） | |
样本 | 0 | 40 | 0 |
标准品溶液 | 0 | 0 | 40 |
去离子水 | 80 | 40 | 40 |
工作液 | 20 | 20 | 20 |
浓硫酸 | 200 | 200 | 200 |
3. 混匀，置 95℃水浴或金属浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取200μL转移至微量玻璃比色皿或96孔板中，于620nm处分别读取空白管、标准管和测定管吸光值，ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。
注意：空白管只需测定1管。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定大于1.6，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
结果计算
1．标准曲线的绘制：
以标准溶液浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
2．可溶性糖含量计算：
将ΔA测定 带入公式中（x）计算样品浓度 y（mg/mL）。
可溶性糖含量(mg/g鲜重)=(y×V样)÷(W×V样÷V样总)＝10×y÷W
V样：加入样本体积，0.04mL；W：样本鲜重，0.1g；V样总：样本总体积，10mL。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
