产品简介
糖类物质是构成动植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、乳糖，以及在测定条件下能水解为还原性单糖的蔗糖、麦芽糖和可能部分水解的淀粉。本试剂盒可检测各种生物样本中总糖含量，其原理是通过将总糖水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后还原DNS生成氨基化合物，在碱性溶液中呈红棕色，在540nm有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与540nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可计算出样品中总糖含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂二 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
DNS试剂 | 2mL | 4mL | 室温避光保存 |
标准品 | 1 | 1 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测540nm处的吸光度）以及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
DNS试剂：常温保存，若有黄色晶体析出，需 90℃加热溶解后再用。
标准品：临用前加入1mL去离子水溶解，配制10mg/mL标准品 ；4℃保存。
标准曲线设置：用去离子水将10mg/mL标准品稀释为2，1.6，1，0.8，0.4，0.2，0.1 mg/mL。
10mg/mL标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 浓度（mg/mL） | |
Std.1 | 40 | 160 | 2 |
Std.2 | 32 | 168 | 1.6 |
Std.3 | 20 | 180 | 1 |
Std.4 | 16 | 184 | 0.8 |
Std.5 | 8 | 192 | 0.4 |
Std.6 | 4 | 196 | 0.2 |
Std.7 | 2 | 198 | 0.1 |
样本制备
1. 植物或动物组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一，1.5mL去离子水，匀浆，沸水浴30min，加入1mL试剂二，混匀，去离子水定容至10mL，8,000g， 25℃离心10min，取上清液待测。
2. 细胞或细菌：收集5×106个细胞或细菌，用冷PBS清洗细胞或细菌后，离心后弃上清，加入1mL试剂一，1.5mL去离子水，匀浆，沸水浴30min，加入1mL试剂二，混匀，去离子水定容至10mL，8,000g， 25℃离心10min，取上清液待测。
3. 血清、血浆、尿液（和其它生物学液体）：取0.1mL 液体样本，加入1mL 试剂一，1.5mL去离子水，混匀，沸水浴30min，加入1mL试剂二，混匀，去离子水定容至10mL，8,000g，25℃离心10 min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30 min以上，调节波长到540 nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表，在EP管中依次加入下列试剂：
空白管（µL） | 标准管（µL） | 测定管（µL） | |
样本 | 0 | 0 | 30 |
标准品 | 0 | 30 | 0 |
去离子水 | 30 | 0 | 0 |
DNS 试剂 | 30 | 30 | 30 |
混匀，沸水浴10min（盖紧，防止水分散失），取出冷却至室温 | |||
去离子水 | 180 | 180 | 180 |
混匀，取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，在540nm处测定各孔的吸光度，分别记为A空白，A标准和A测定，计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白 | |||
注意：空白管只需测一次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定小于0.005可适当加大样本量。如果A测定大于2.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1．标准曲线的绘制：
以标准品浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线。将 ΔA测定带入公式计算出y值（mg/mL）。
2. 样本总糖含量计算
（1）按样本质量计算：
总糖含量(mg/g)=y×V样÷（W×V样÷V样总）×n=10×y÷W×n
（2）按按照细菌或细胞数量计算：
总糖含量（mg/104cells）=y×V样÷(500×V样÷V样总)×n=0.02×y×n
（3）按液体样本体积计算：
总糖含量(mg/mL)=y×V样÷（V液×V样÷V样总）×n=100×y×n
V样：加入样本体积，0.03mL；V样总：样本总体积，10mL；W：样本质量，0.1g；500：细菌或细胞总数，500万；V液：液体样本体积，0.1mL；n：稀释倍数。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
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