产品简介
植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化，抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法，用于检测植物酚类物质含量，其原理是在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样品总酚含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
反应缓冲液 | 2.5mL | 5mL | 4℃保存 |
2.5mL | 5mL | 4℃避光保存 | |
单宁酸标准品 | 1 | 2 | 4℃避光保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测760nm处的吸光度）及水浴锅和烘箱
离心机和超声破碎仪、96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
粉碎仪（或破壁机）、40目筛、去离子水和乙醇
试剂准备
反应缓冲液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
显色物：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
单宁酸标准品：临用前每管加入1mL 去离子水溶解，配制成 5mg/mL 标准品备用，4℃可保存1周。若需长期保存，请分装后-20℃保存，避免反复冻融。
标准曲线设置： 按下表所示用蒸馏水将5mg/mL 单宁酸标准品稀释为 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156、0.0078 mg/mL 的标准溶液。
标准品体积 | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（mg/mL） | |
Std.1 | 100µL of 5mg/mL | 900 | 0.5 |
Std.2 | 100µL of Std.1(0.5mg/mL) | 100 | 0.25 |
Std.3 | 100µL of Std.2 (0.25mg/mL) | 100 | 0.125 |
Std.4 | 100µL of Std.3 (0.125mg/mL) | 100 | 0.0625 |
Std.5 | 100µL of Std.4 (0.0625mg/mL) | 100 | 0.0313 |
Std.6 | 100µL of Std.5 (0.0313mg/mL) | 100 | 0.0156 |
Std.7 | 100µL of Std.6 (0.0156mg/mL) | 100 | 0.0078 |
注意：标准品尽量现配现用，稀释后的标准品不宜长久放置。
样本制备
植物组织：将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL 60%乙醇，用超声提取法进行提取（功率300W，温度25℃，时间30min）。12,000rpm，25℃，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至2.5 mL，待测。
果汁和蜂蜜等液体样本：直接测定。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到760nm,可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定（在96孔板或微量玻璃比色皿中）：
空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | |
样本 | 0 | 0 | 10 | 10 |
不同浓度标准品 | 0 | 10 | 0 | 0 |
去离子水 | 10 | 0 | 0 | 0 |
50 | 50 | 50 | 0 | |
混匀，室温静置2min | ||||
反应缓冲液 | 50 | 50 | 50 | 50 |
去离子水 | 90 | 90 | 90 | 140 |
混匀，室温静置10min，测定760nm吸光值。计算 ΔA测=A测定-A对照，ΔA标=A标准-A空白。空白孔只需做一个，每个样本都需要设置一个对照孔。 | ||||
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 大于 1.0，需要将样本用去离子水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。显色完成后立即测定，2小时后吸光值会下降。
结果计算
1. 标准曲线的绘制：
以标准溶液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
2.总酚含量计算：
根据标准曲线，将ΔA测带入公式中计算样品浓度y（mg/mL）。
（1）按样本质量计算：
总酚(mg/g 质量)=y×V样÷(W×V样÷V提取)×n＝y×V提取÷W×n=2.5y÷W×n
（2）按液体体积计算：
总酚(mg/mL)= y×V样÷V样×n=y×n
V样：加入的样本体积，0.01 mL；W：样本质量，g：V提取：加入提取液体积，2.5mL；n：稀释倍数。
注意：如果需要将mg/mL的单位换算为mg/g可以除以液体的密度。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
