产品简介
赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。本试剂盒提供了一种简单的检测方法，可检测各种生物样本中赖氨酸含量，其原理是蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度, 来计算赖氨酸含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 6.25mL | 12.5mL | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃避光保存 |
赖氨酸标准品 | 粉剂×1支 | 粉剂×1支 | 4℃避光保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测570nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机
去离子水、乙醇
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：临用前配制，96T加入12.5mL 95%乙醇充分溶解，48T加入6.25mL 95%乙醇充分溶解，未用完的已溶解的试剂二可4℃避光保存一周。若需长期保存，请分装后-20℃保存，避免反复冻融。
工作液的配制：按试剂一:已溶解的试剂二=1:1的比例，根据样本量按需求配制。
赖氨酸标准品：临用前配制，加1.71mL去离子水，充分溶解得到40μmol/mL标准品，未用完的已溶解的标准品可4℃避光保存一周。若需长期保存，请分装后-20℃保存，避免反复冻融。
标准曲线设置：把40μmol/mL标准品按下表所示，进行下一步稀释。
标准品体积 | 提取液体积（µL） | 标准品浓度（μmol/mL） | |
Std.1 | 20µL of 40μmol/mL | 380 | 2 |
Std.2 | 200 µL of Std.1（2μmol/mL） | 200 | 1 |
Std.3 | 200 µL of Std.2 (1μmol/mL) | 200 | 0.5 |
Std.4 | 200 µL of Std.3 (0.5μmol/mL) | 200 | 0.25 |
Std.5 | 200 µL of Std.4 (0.25μmol/mL) | 200 | 0.125 |
Std.6 | 200 µL of Std.5 (0.125μmol/mL) | 200 | 0.0625 |
Std.7 | 200 µL of Std.6 (0.0625μmol/mL) | 200 | 0.0313 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
动物组织：称取约0.1g样本，加入1mL 提取液，室温下充分匀浆，转移到 1.5mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于80℃水浴提取20min；冷却后，10,000g，室温离心 10min，取上清液待测。
植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL 提取液捣碎，室温超声波破碎 5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到 1.5mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于80℃水浴提取20min；冷却后，10,000g，室温离心 10min，取上清液待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL 提取液，室温超声波破碎 5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到 1.5mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于80℃水浴提取20min；冷却后，10,000g，室温离心 10min，取上清液待测。
细胞上清或血清（浆）：在1.5mL EP管中，吸取 0.5mL液体加入 0.5mL 提取液，盖紧后（防止水分散失）置于80℃水浴提取20min；冷却后，10,000g，室温离心 10min，取上清液，待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
推荐用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到570nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
提取液 | 100 | 0 | 0 |
不同浓度标准品 | 0 | 100 | 0 |
样本 | 0 | 0 | 100 |
工作液 | 200 | 200 | 200 |
混匀，80℃水浴30min（盖紧，以防止水分散失），冷却至常温。加入300μL 60%乙醇混匀，取200μL至96孔板或微量石英比色皿中，于570nm测定吸光值，计算ΔA测=A测定-A空白、ΔA标=A标准-A空白（空白管只需做1管）。显色后务必在30min内测完。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA测小于0.001可适当加大样本量，如果ΔA测大于1.2，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制
以标准液浓度为y轴，ΔA标为x轴绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将ΔA测带入标准曲线公式计算出y（μmol/mL）。
2. 样本赖氨酸含量计算
（1）按样本质量计算
赖氨酸含量(μmol/g 质量)=y×V样本÷(V样本÷V样总×W)×n=y÷W×n
（2）按蛋白浓度计算
赖氨酸含量(μmol/mg prot)=y×V样本÷(Cpr×V样本)×n=y÷Cpr×n
（3）按细菌或细胞数量计算
赖氨酸含量(μmol/104 cell)=y×V样本÷(细胞数量×V样本÷V样总)×n=y÷500×n=y÷500×n=0.002y×n
（4）按液体体积计算
赖氨酸含量(μmol/mL)=y×V样本÷V样本×2×n=y×2×n
V样本：加入样本体积：0.1mL；V样总：提取体系体积，1mL；W：样本质量，g；n：样本进一步稀释的稀释倍数；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细菌或细胞总数，500万个；2：提取液体时的稀释倍数，（0.5 mL+0.5 mL）/0.5 mL=2。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
相关产品：
PMK1046 脯氨酸（PRO）检测试剂盒（微量法）
PMK1084谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒（微量法）
PMK1085 谷草转氨酶（AST/GOT）检测试剂盒（微量法）
PMK1090 半胱氨酸（Cys）检测试剂盒（微量法）
PMK1091 谷氨酸（Glu）检测试剂盒（微量法）
