产品简介
花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素，属黄酮类化合物，是水溶性黄酮类色素中最重要的一类。花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。它呈色不同的机理在很大程度上是由于花色素苷化学结构上的微小差别，或者化学结构虽然相同，但由于溶液的物理或化学条件不同也会产生色调的变化。根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 10mL | 20mL | 4℃保存 |
试剂二 | 10mL | 20mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测530nm和700nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机、天平
匀浆器
试剂准备
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
样本制备
植物组织：称取约 0.1g样本，加入1mL提取液，充分匀浆后转移到EP管中，盖紧后 60℃浸提 30min，期间可震荡数次，取出，提取液定容至1mL。12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。
实验步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上；试剂一和试剂二25℃（室温）预热10min以上；
2. 取20µL上清液和180µL试剂一（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm和700nm处的吸光值，分别记为A1和A2。
3. 取20µL上清液和180µL试剂二（相当于稀释10倍），40℃水浴20min，分别测定530nm和700nm处的吸光值，分别记为A3和A4。
4. 计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注意：1. 如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积200µL不变，如10µL上清液和190µL试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如40 µL上清液和160 µL试剂一（相当于稀释5倍），使A1保持在0.1-1范围内，可提高检测灵敏度；同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际上清液体积代入下述公式中。
2. 如果出现△A计算结果为负数的异常情况，可能样本中花色苷含量太低或者有干扰物，无法测定。
结果计算
A. 使用96孔板测定的计算公式
花色苷含量（nmol/g 质量）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×106]÷(V样÷V样总×W )
=14.87×ΔA÷V样÷W=743.49×ΔA÷W
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：花色苷的摩尔消光系数，2.69×104mL/mmol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；106：单位换算系数，1mmol=106nmol；W：样本质量：g。
B. 使用微量比色皿测定的计算公式
将上述计算公式中的光径d：0.5cm调整为d：1cm进行计算即可。
实验实例
1. 分别取 0.1g 紫色葡萄皮和0.1g 粉红色夹竹桃花瓣加入1mL提取液充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提 30min，每5min震荡1次，提取后提取液定容至1mL，离心取上清后按照测定步骤操作，用96 孔板测得计算Δ皮=(0.579-0.047)-(0.103-0.052)=0.481
ΔA花=(0.268-0.052)-(0.096-0.065)=0.185
按样本质量计算含量得:
葡萄皮花色苷含量（nmol/g质量）=743.49×ΔA皮÷W=3576.19nmol/g质量
夹竹桃花瓣花色苷含量（nmol/g质量）=743.49×ΔA花÷W=1375.46nmol/g质量
