氮代谢系列

谷氨酸脱氢酶(GDH)检测试剂盒

货号:PMK1073
规格:48T/96T
价格:720元/1200元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

谷氨酸脱氢酶(GDH)位于动植物以及微生物体中,对于三羧酸循环的能量代谢、细胞内氧化还原平衡、氨含量的稳态维持和信号转导的调控起着至关重要的作用。和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同参与谷氨酸的合成,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。本试剂盒提供了一种简单的比色法来检测生物样本中谷氨酸脱氢酶(GDH)活其原理是GDH催化NH4+α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+NADH340nm处有特征吸收峰,NADH的消耗引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率,计算GDH活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

50mL

100mL

4℃保存

试剂一

10mL

20mL

4℃保存

试剂二

粉剂×1瓶

粉剂×2瓶

4℃保存

自备耗材

酶标仪或紫外分光光度计(能测 340nm处的吸光值)及恒温培养箱

96孔UV微孔或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头

离心机、制冰机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

提取液:即用型; 4℃保存

试剂一:即用型;使用前平衡到室温;4℃保存。

试剂二:临用前每瓶试剂二中加入10mL试剂一充分溶解混匀现配现用(配好后12h内用完)。

样本制备

组织:称取约0.1g组织,加入1mL预冷的提取液,冰浴匀浆8,000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

细菌或细胞:先收集500细菌或细胞到离心管内,用冷PBS清洗细菌或细胞,离心后弃上清,加入1mL预冷的提取液,冰浴超声波破碎细菌或细胞5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次),然后, 8,000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆)等液体样本: 可直接测定。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒,进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上,调节波长到340nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2. 试剂二置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min

3. 样本测定96孔UV微孔或微量石英比色皿中加入10μL样本和190μL试剂二,混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值A15min20s后的吸光值A2,计算ΔA=A1-A2

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA大于0.5,样本可用提取液进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数。

结果计算

A.  96 孔板测定的计算公式如下:

1.按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位U 

GDHU/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V÷V样总)÷T=1286×ΔA÷W

2. 按液体体积计算:

单位的定义:每mL液体样本在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位U

GDH(U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V÷T=1286×ΔA

3. 细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位U

GDHU/104 Cells)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(500×V÷V样总)÷T=2.572×ΔA

4. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol NADH定义为一个酶活力单位U

GDH(U/mg prot)[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V×Cpr)÷T=1286×ΔA÷Cpr

V反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;1091 mol=109 nmol;V:加入样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5min;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万个Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中光径 d:0.5cm 调整为 d:1cm 进行计算即可。


注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


相关产品

PMK1071 谷氨酸合成酶(GOGAT)检测试剂盒

PMK1091 谷氨酸(Glu)检测试剂盒

PMK1068 硝酸还原酶(NR)检测试剂盒

PMK1069 硝酸还原酶(NR)检测试剂盒(NADH速率法)

PMK1074 NO检测试剂盒

PMK1076 谷氨酰胺合成酶(GS)检测试剂盒


SIGNUP FOR OUR NEWSLETTER
Subscribe free newsletter to get latest products and discount information.

武汉普美克生物技术有限公司 © All Rights Reserved. 地址:武汉市东湖高新区自贸生物创新港B区N803-804

电话:400-0698-668  手机:  Email:bioprimacy@aliyun.com

鄂ICP备17001029号-1