酸性磷酸酶（ACP）检测试剂盒 - 酯酶系列 - 产品展示 - 武汉普美克生物技术有限公司

产品简介

ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。本试剂盒提供了一种简单、快速的ACP检测方法，其检测原理是在酸性环境中，ACP催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。

产品内容

试剂盒组分	规格		储存条件
试剂盒组分	48T	96T
提取液	60mL	120mL	4℃保存
试剂一	3mL	6mL	4℃避光保存
试剂二	3mL	6mL	4℃
标准品（5μmol/mL对硝基苯酚）	1mL	1mL	4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计（能测405nm处的吸光度）

恒温箱、制冰机、低温离心机

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

去离子水

匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。

提取液：即用型；4℃保存。

试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

标准品：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

样本制备

1. 组织样本：称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆，10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。

2. 细胞：收集500万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL 提取液，冰浴超声波破碎细胞5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。

3. 血清（浆）等液体样本：血清（浆）可以直接用于测定。

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到405nm，可见光分光光度计去离子水调零。

2. 按照下表在96孔板或微量玻璃比色皿中进行加样及反应：

	空白孔（μL）	标准孔（μL）	对照孔（μL）	测定孔（μL）
提取液	100	90	190	90
标准品	0	10	0	0
样本	0	0	10	10
试剂一	100	100	0	100
混匀后置于37℃避光孵育10min
试剂二	40	40	40	40

混匀，于405nm测定吸光度，其中标准和空白只需测定一次，每个样本均需设置对照，各孔的吸光度分别记为A_空白，A_标准，A_对照，A_测定，计算ΔA_测=A_测定-A_对照、ΔA_标=A_标准-A_空白。

注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA_测小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA_测大于2.0，样本可用提取液进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

1. 按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

ACP (U/mg prot)=（C标准品×ΔA测÷ΔA标×V反总）÷(Cpr×V样)÷T=10×ΔA测÷ΔA标÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

活性单位定义：37℃中每克组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

ACP(U/g鲜重)=（C标准品×ΔA测÷ΔA标×V反总）÷(W÷V提取×V样)÷T=10×ΔA测÷ΔA标÷W

3. 按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升血液或尿液在反应体系中每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

ACP (U/mL)=（C标准品×ΔA测÷ΔA标×V反总）÷V样÷T =10×ΔA测÷ΔA标

4.按细胞数目计算

活性单位的定义：37℃中每1万个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

ACP（U/104 cells）=（C标准品×ΔA测÷ΔA标×V反总）÷(细胞数量×V样÷V提取)÷T=0.02×ΔA测÷ΔA标

C标准品：标准品的浓度，5μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.2mL； V样：加入反应体系中上清液体积，0.01mL；T：反应时间，10min；V提取：加入提取液体积，1mL； W：样本鲜重，g；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞数量，500万。