酯酶系列

碱性磷酸酶(AKP/ALP)检测试剂盒

货号:PMK1096
规格:48T/96T
价格:250元/410元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

碱性磷酸酶(AKP/ALP)是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。试剂盒提供了一种简单、快速的AKP/ALP检测方法,其检测原理是在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算AKP/ALP活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

50mL

100mL

4℃保存

试剂一

2.5mL

5mL

4℃避光保存

试剂二

2.5mL

5mL

4℃避光保存

试剂三

7.5mL

15mL

4℃避光保存

准品(2μmol/mL酚标准液

0.5mL

0.5mL

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测510nm处的吸光度)

恒温箱、制冰机、低温离心机

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

注意:各组分(小管试剂)开盖前,请先低速离心。

提取液:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

试剂二:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

试剂三:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

标准品:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

样本制备

1. 组织样本:称取约0.1g样本,加入1mL提取液,冰浴匀浆,10,000 rpm,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

2. 细胞:收集500万细胞到离心管内,用冷PBS清洗细胞,离心后弃上清,加入1mL 提取液,冰浴超声波破碎细胞5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次),然后10,000 rpm,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。

3. 血清(浆):血浆和血清可以直接用于测定。血浆制备时不能用EDTA和柠檬酸盐,可用其它抗凝剂。

4. 尿液:直接测定。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上,调节波长到510nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2. 按照下表进行加样及反应:


空白μL)

标准μL)

对照μL)

测定μL)

去离子水

4

0

0

0

标准品

0

4

0

0

样本

0

0

0

4

试剂一

40

40

40

40

试剂二

40

40

40

40

混匀后置于37℃孵育15min

试剂三

120

120

120

120

样本

0

0

4

0

混匀后于510nm测定吸光度,其中标准和空白只需测定一次,每个样均需设置对照,各的吸光度分别记为A空白A标准A对照A测定计算ΔA=A测定-A对照ΔA=A标准-A空白

注意:实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA大于1.0,样本可用提取液进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

结果计算

1. 按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP (U/mg prot)=C标准品×ΔA÷ΔA×V反总÷(Cpr×V)÷T=6.8×ΔA÷ΔA÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

活性单位定义:37℃中每克组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP(U/g鲜重)=C标准品×ΔA÷ΔA×V反总÷(W÷V提取×V)÷T=6.8×ΔA÷ΔA÷W

3. 按液体体积计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液或尿液在反应体系中每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALP (U/mL)=C标准品×ΔA÷ΔA×V反总÷V÷T =6.8×ΔA÷ΔA

4.按细胞数目计算

活性单位的定义:37℃中1万个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。

AKP/ALPU/104 cells)=C标准品×ΔA÷ΔA×V反总÷(细胞数量×V÷V提取)÷T=6.8×ΔA÷ΔA÷500

C标准品:标准品的浓度,2μmol/mL;V反总:反应体系总体积0.204mL; V:加入反应体系中上清液体积,0.004mL;T:反应时间,15min;V提取:加入提取液体积,1mL; W:样本鲜重,g;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL500:细胞数量500万

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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