蛋白酶系列

酸性蛋白酶检测试剂盒

货号:PMK1131
规格:48T/96T
价格:660元/1100元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

适用样本:组织、细菌、血清(浆)或培养液等液体样本

ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、 酱油酿造、饲料等。试剂盒提供了一种简单、快速的酸性蛋白酶检测方法,其检测原理是 酸性条件下,ACP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算ACP活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

液体一

1mL

2mL

4℃保存

液体二

0.5mL

1mL

4℃保存

试剂一

粉剂×1瓶

粉剂×1瓶

4保存

试剂二

粉剂×1瓶

粉剂×1瓶

4避光保存

试剂

粉剂×1瓶

粉剂×1瓶

4保存

试剂

2mL

4mL

4避光保存

标准品

1mL

1mL

4保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测680nm处的吸光度)

水浴锅、制冰机、低温离心机

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

去离子水

匀浆器

试剂准备

提取液的配制:临用前按液体一:液体二:去离子水=90μL:20μL:21mL的比例配制,现配现用,如出现白色絮状沉淀则不能用。

试剂一临用前48T加2mL去离子水96T4mL 去离子水;充分溶解未用完的试剂4度保存。

试剂二临用前48T加入5mL提取液96T加入10mL提取液沸水浴中搅拌溶解般加热15-30分钟该试剂为过饱和试剂,充分混匀后仍出现颗粒物不溶物,不影响使用。

试剂三临用前48T加入10mL去离子水96T加入20mL去离子水,充分溶解未用完的试剂4度保存。

试剂四:即用型;使用前平衡到室温;4避光保存

标准品:50μg/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。

样本制备

组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液,冰浴匀浆,8,000g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测。(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)。

细菌或真菌:收集500万细菌或真菌到离心管内,用冷PBS清洗细菌或真菌,离心后弃上清,加入1mL 提取液,冰浴超声波破碎细菌或真菌5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次),然后8,000g,4℃离心20min,取上清液,置冰上待测。

血清或培养液等液体样本:直接测定。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上,调节波长到680nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2. 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min

3. 样本测定(在EP管中加入下列试剂):


标准μL)

空白μL)

测定(μL)

对照μL)

样本

0

0

20

20

试剂一

0

0

0

40

试剂二

0

0

40

0

混匀后置于 30℃水浴保温10min

试剂

0

0

40

0

试剂二

0

0

0

40

混匀后 8000g,4℃离心 10min;取 40μL上清液,加入新的 EP管

上清

0

0

40

40

去离子水

0

40

0

0

标准品

40

0

0

0

试剂

200

200

200

200

试剂四

40

40

40

40

混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿测定680nm处的吸光值计算ΔA=A-AΔA=A-A。每个测定管需设一个对照,标准和空白只需要测一次

注意:1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.005可适当加大样本量。如果A大于0.3,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数。

结果计算

1.按照样本质量计算

单位的定义:30℃g组织在反应体系每分钟催化水解酪素产生1ug酪氨酸为1个酶活单位。

ACP活性U/g 鲜重= C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷(W×V÷V样总)÷T=15×(ΔA÷ΔA)÷W

2.按照蛋白浓度计算

单位的定义:30℃mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化水解酪素产生1ug酪氨酸为1个酶活单位。

ACP活性U/mg prot)=C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷(Cpr×V÷T=15×(ΔA÷ΔA)÷Cpr

3.按照液体体积计算

单位的定义:30℃每mL样品在反应体系中每分钟催化水解酪素产生1ug酪氨酸为1个酶活单位。

ACP 活性(U/mL)=C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷V÷T=15×(ΔA÷ΔA)

4.细菌或真菌细胞数量计算

单位的定义:30℃1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化水解酪素产生1ug酪氨酸为1个酶活单位。

ACP 活性(U/104 cells= C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷(500×V÷V样总)÷T= 0.03×(ΔA÷ΔA)

C标准溶液浓度,50μg/mLV反总:反应体系总体积,0.06mL;W:样本质量,g;V:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间10minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mL500:细菌或真菌细胞总数,500万。

 

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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