产品简介
脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，隶属于羧基酯水解酶类，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。本试剂盒可检测各种生物样本中LPS活性，其原理是LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48 T | 96 T | ||
试剂一 | 65mL×1瓶 | 65mL×2瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 5mL | 10mL | 4℃保存 |
试剂三 | 5mL | 10mL | 4℃保存 |
标准品 | 10uL | 10uL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测710nm处的吸光度）
制冰机、台式离心机、摇床
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
甲苯、去离子水、无水乙醇
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。每次使用前剧烈震荡混匀。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准品：临用前加入3.168mL无水乙醇混匀得10µmol/mL的标准溶液，4℃保存。
样本制备
动植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL试剂一，冰浴匀浆，12,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
细胞或细菌：收集500万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL试剂一，冰浴超声波破碎细胞5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后12,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
血清（浆）等液体样本: 直接检测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。对于脂肪含量较高的动物组织，离心后移除上层脂肪，再取上清液。如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长到710nm。分光光度计去离子水调零。
2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min。
3. 样本测定（1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：
测定（μL） | 空白（μL） | |
样本 | 50 | 0 |
去离子水 | 0 | 150 |
试剂一 | 300 | 300 |
试剂二 | 100 | 0 |
37℃摇床上振荡反应10min（没有摇床可以每2min上下混匀一次） | ||
甲苯 | 800 | 800 |
37℃摇床上振荡反应10min后，8000g，25℃，离心10min，取上清液
测定（μL） | 空白（μL） | 标准（μL） | |
上清液 | 200 | 200 | 0 |
标准品 | 0 | 0 | 200 |
试剂三 | 50 | 50 | 50 |
37℃振荡反应5min后，静置5min，取100μL上层液加入96孔板或微量玻璃比色皿，测定710nm处吸光值A，空白管记为A空，标准管记为A标、测定管记为A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。空白管和标准管只需测定一次。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA大于0.6，样本可用试剂一进一步稀释（计算结果乘以稀释倍数），或减少提取用样本量。
结果计算
（1）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织在反应体系中每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS µmol/min/g 鲜重)=C标×(ΔA测÷ΔA标)×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T=9×(ΔA测÷ΔA标)÷W
（2）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白在反应体系中每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (µmol/min/mg prot)=C标×(ΔA测÷ΔA标)×V反总÷（Cpr×V样)÷T=9×(ΔA测÷ΔA标)÷Cpr
（3）按照细菌或者细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每104个细胞在反应体系中每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS µmol/min/104cell)=C标×(ΔA测÷ΔA标)×V反总÷（细胞数量×V样÷V样总)÷T=0.018×(ΔA测÷ΔA标)
（4）桉液体体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升液体样本在反应体系中每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (µmol /min/mL)=C标×(ΔA测÷ΔA标)×V反总÷V样÷T=9×(ΔA测÷ΔA标)
C标：10µmol/mL；V反总：反应总体积，0.45mL；V样：反应中加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：催化反应时间，10min。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
