产品简介
脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存。在脂质代谢和转运中发挥重要作用，并在不同的组织表现出不同的生理意义。本试剂盒可检测生物体内LPL活性，其原理是脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。测定400nm处光吸收的增加量来计算LPL活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 52.5mL | 105mL | 4℃保存 |
试剂二 | 2mL | 4mL | -20℃避光保存 |
试剂三 | 5mL | 10mL | 4℃保存 |
标准品（5mM对硝基苯酚） | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测400nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
恒温箱、低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
试剂一：即用型；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃避光保存。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准品：标准品为5mM（μmol/mL）的对硝基苯酚溶液，使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准曲线设置：按下表所示，用试剂一将5μmol/mL标准品稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6nmol/mL的标准溶液。
标准品体积（µL） | 试剂一体积（µL） | 标准品浓度（nmol/mL） | |
标准品1 | 40µL of 5μmol/mL | 160 | 1000 |
标准品2 | 100µL of 标准品1 (1000nmol/mL) | 100 | 500 |
标准品3 | 100µL of 标准品2 (500nmol/mL) | 100 | 250 |
标准品4 | 100µL of 标准品3 (250nmol/mL) | 100 | 125 |
标准品5 | 100µL of 标准品4 (125nmol/mL) | 100 | 62.5 |
标准品6 | 100µL of 标准品5 (62.5nmol/mL) | 100 | 31.25 |
标准品7 | 100µL of 标准品6 (31.25nmol/mL) | 100 | 15.6 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
组织：称取0.1g样本，加入1mL试剂一，冰浴匀浆，10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
细胞：收集500万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL试剂一，冰浴超声波破碎5min（功率20％或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
血清（浆）等液体样本：直接测定。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到400nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂）：
标准孔（μL） | 空白孔（μL） | 对照孔（μL） | 测定孔（μL） | |
标准品 | 20 | 0 | 0 | 0 |
样本上清液 | 0 | 0 | 20 | 20 |
试剂一 | 80 | 100 | 80 | 0 |
试剂二 | 0 | 0 | 0 | 80 |
混匀，45℃孵育10min | ||||
试剂三 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混匀，25℃静置2min，测定400nm处吸光值，分别记为A标准、A空白、A对照，A测定。计算ΔA标=A标准-A空白，ΔA测=A测定-A对照。标准曲线和空白只要做一次即可，每个测定管需要设一个对照管。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.005可适当加大样本量。如果A测定大于2，样本可用试剂一适当稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制：
以标准品浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将ΔA测带入方程计算出y值（nmol/mL）。
2. 样本LPL活性计算
（1）按样本质量计算
酶活性单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每g组织在反应体系中每分钟水解产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位U。
LPL活性(U/g 质量)＝(y×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T=0.5×y÷W
（2）按液体样本体积计算
酶活性单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每mL液体样本在反应体系中每分钟水解产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位U。
LPL活性(U/mL)＝(y×V反总)÷V样÷T=0.5×y
（3）按细胞数量计算
酶活性单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每每1万个细胞样本在反应体系中每分钟水解产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位U。
LPL活性(U/104 cell)= (y×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.001×y
（4）按蛋白浓度计算
酶活性单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每mg组织蛋白在反应体系中每分钟水解产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位U。
LPL活性（U/mg prot）=(y×V反总)÷(Cpr×V样)÷T=0.5×y÷Cpr
V反总：反应体系总体积，0.1mL；V样：加入样本体积，0.02mL ；V样总：加入试剂一体积，1mL；T：反应时间，10min；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
结果展示
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
