产品简介
直链淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷键连接的多糖链,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义,与食品安全息息相关。本试剂盒提供了一种简单的比色法来检测植物组织等样本中直链淀粉含量,其原理是:利用乙醇分开样本中的可溶性糖和淀粉,直链淀粉与碘形成的络合物在620nm下有吸收峰,测定620nm下的吸光度可计算直链淀粉含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂二 | 50mL(自备) | 100mL(自备) | 4℃保存 |
试剂三 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂四 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
试剂五 | 150uL | 300uL | 4℃避光保存 |
标准品(10mg 直链淀粉) | 粉剂×1支 | 粉剂×1支 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计(能测620nm处的吸光度)
离心机、水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水、乙醚
研钵或破壁机
试剂准备
试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。
试剂二:乙醚,自备。
试剂三:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。
试剂四:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。
试剂五:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。
标准品:每支含10mg直链淀粉。临用前加入0.1mL无水乙醇和 0.9mL试剂三,混匀后封口膜封口,沸水浴至溶解,即10mg/mL 的直链淀粉,2-8℃保存半年。取40μL 10mg/mL 标准溶液,加入960μL 试剂三,充分混匀,配制成 0.4mg/mL标准溶液使用,现用现配。
淀粉提取
称取0.01烘干样本于研钵中研碎(若较难研碎可先用破壁机粉碎再称取0.01g),加入1mL试剂一,充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂二(乙醚)振荡5min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂三充分溶解,90℃水浴10min,冷却后待测。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上,调节波长到620nm;可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定:
测定管:在96孔板或微量比色皿中依次加入20μL样本,14μL试剂四,120μL去离子水,2μL试剂五,44uL去离子水,混匀,测定620nm处吸光值,记为A测定。
空白管:在96孔板或微量比色皿中依次加入20μL试剂三,14μL试剂四,120μL去离子水,2μL试剂五,44μL去离子水,混匀,测定620nm处吸光值,记为A空白。
标准管:在96孔板或微量比色皿中依次加入20μL 0.4mg/mL直链淀粉标准溶液,14μL试剂四,120μL去离子水,2μL试剂五,44μL去离子水,混匀,测定620nm处吸光值,记为A标准。
结果计算
计算∆A标=A标-A空,∆A测=A测-A空
直链淀粉含量(mg/g 质量)=C标准×(ΔA测÷ΔA标)÷(W÷V样总)=0.4×(ΔA测÷ΔA标)÷W
C标准:标准溶液浓度,0.4mg/mL;V样总:加入试剂三体积,1mL;W:样本质量,g。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。