产品简介
海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。本试剂盒检测原理为蒽酮比色法，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃避光保存 |
试剂一 | 粉剂1瓶 | 粉剂2瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 10mg | 10mg | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测620nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头
制冰机，离心机，水浴锅或金属浴
去离子水，浓硫酸
匀浆器
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
工作液配制：临用前配制，取1瓶试剂一加入1.9mL去离子水后，缓慢加入10.6mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，备用；用不完的试剂可4℃保存一周或-20℃长期保存。由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
标准品：临用前向10mg的海藻糖标准品中加入1mL去离子水溶解，配制成10mg/mL标准溶液备用，4℃可保存1周或-20℃长期保存。
标准曲线设置：按下表所示，用去离子水将10mg/mL标准品稀释为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156 mg/mL 的标准溶液。
标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（mg/mL） | |
标准品1 | 20µL 10mg/mL | 380 | 0.5 |
标准品2 | 200µL of 标准品1 (0.5mg/mL) | 200 | 0.25 |
标准品3 | 200µL of 标准品2 (0.25mg/mL) | 200 | 0.125 |
标准品4 | 200µL of 标准品3 (0.125mg/mL) | 200 | 0.0625 |
标准品5 | 200µL of 标准品4 (0.0625mg/mL) | 200 | 0.0313 |
标准品6 | 200µL of 标准品5 (0.0313mg/mL) | 200 | 0.0156 |
标准品7 | 200µL of 标准品6 (0.0156mg/mL) | 200 | 0.0078 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
植物或动物组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL 提取液，匀浆，室温静置45min，振荡 3-5次，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。
细菌或细胞：收集5×106个细菌或细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞或细菌，离心后弃上清，加入1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），室温静置45min，振荡 3-5次，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。
血清（浆）等液体样本：取0.1mL 血清（浆）加入提取液1mL，充分混匀；室温静置45min，振荡 3-5次，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到620nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 调节水浴锅或金属浴至95度。
3. 样本测定（在EP管中）：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | |
样本 | 0 | 0 | 60 |
标准品溶液 | 0 | 60 | 0 |
去离子水 | 60 | 0 | 0 |
工作液 | 240 | 240 | 240 |
混匀，置95℃水浴或金属浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取200μL转移至微量玻璃比色皿或96孔板中，于620nm处分别读取空白管、标准管和测定管吸光值，ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。
注意：空白管只需测定1管。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测大于2.0，需要将样本用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
结果计算
1．标准曲线的绘制：
以标准溶液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将ΔA测带入公式中（x）计算样品浓度 y（mg/mL）。
2．海藻糖含量计算：
1）按样本质量计算：
海藻糖含量(mg/g)=y×V样÷（W×V样÷V样总）×n=y÷W×n
2) 按细菌或细胞数量计算：
海藻糖含量（mg/104cells）= y×V样÷(500×V样÷V样总)×n=y÷500×n=0.002×y×n
3) 按血清（浆）体积计算：
海藻糖含量（mg/mL）=y×V样÷（V液×V样÷V样总）×n=10×y×n
V样：加入样本体积，0.06mL；V样总：样本总体积，1mL；W：样本质量，0.1g；500：细菌或细胞总数，500万；V液：液体样本体积，0.1mL；n：稀释倍数。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
