产品简介

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（Basic Xylanase，BAX）一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。本试剂盒可检测各种生物样本中BAX活性，其原理是BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算BAX活力。

产品内容

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计（能测540nm处的吸光度）以及水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头

低温离心机，制冰机

去离子水

匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

注意：小管试剂开盖前，请先低速离心。

缓冲液：即用型；4℃保存。

试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

标准品：含10 mg木糖，临用前加入 667μL去离子水配制成 100μmol/mL的木糖标准储液，2-8℃保存 8 周或-20℃长期保存。取40µL 100μmol/mL的木糖标准储液加入360µL去离子水得10μmol/mL的标准溶液。

注意：每次实验，请使用新配制的标准溶液。

样本制备

组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL缓冲液冰浴匀浆，8,000g，4℃离心10min，取上清液置冰上待测。

细菌或细胞：收集5×10⁶个细菌或细胞到离心管内，用冷PBS清洗细菌或细胞，离心后弃上清，加入1mL 缓冲液，冰浴超声波破碎细菌或细胞5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次）。8,000g，4℃离心10min，取上清液置冰上待测。

发酵液：发酵液于8000g，4℃离心15min，取上清，作为待测样品。

酶干粉：称约1mg，加1mL缓冲液溶解后置冰上待测。

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。含还原糖较高的样本（如植物果实等）可用去离子水进行适当稀释后再进行测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，可见分光光度计去离子水调零。

2. 操作表（在EP管中）：

涡旋混匀，沸水浴5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冷却至室温后，吸取200μL于 96孔板或微量玻璃比色皿中，尽快于540nm处分别读取空白管、标准管、对照管和测定管吸光值，计算ΔA_测=A_测定-A_对照，ΔA_标=A_标准-A_空白。

注意：空白管和标准管只需测定1次，每个测定管设一个对照管。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA_测大于1.0，需要将样本用提取液稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。如果ΔA_测小于0.001可适当加大样本量。

结果计算

1. 按发酵液等液体的体积计算：

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每mL发酵液在反应体系中每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖（木糖）所需的酶量为一个酶活力单位U。

BAX活力（U/mL）=C_标×(ΔA_测÷ΔA_标)×V_反总÷V_样÷T=1.75×(ΔA_测÷ΔA_标)

2. 按样本质量计算

1）酶干粉BAX活力计算

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每mg酶在反应体系中每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖（木糖）所需的酶量为一个酶活力单位U。

BAX活力（U/mg 质量）=C_标×(ΔA_测÷ΔA_标)×V_反总÷(W₁×V_样÷V_样总)÷T=1.75×(ΔA_测÷ΔA_标)÷W₁

2) 组织中BAX活力计算

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每g组织在反应体系中每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖（木糖）所需的酶量为一个酶活力单位U。

BAX活力（U/g 质量）=C_标×(ΔA_测÷ΔA_标)×V_反总÷(W₂×V_样÷V_样总)÷T=1.75×(ΔA_测÷ΔA_标)÷W₂

3. 按细菌或细胞数量计算：

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖（木糖）所需的酶量为一个酶活力单位U。

BAX活力（U/10⁴cells）=C_标×(ΔA_测÷ΔA_标)×V_反总÷(500×V_样÷V_样总)÷T=0.0035×(ΔA_测÷ΔA_标)

4. 按蛋白浓度计算：

BAX活力(U/mg prot)=C_标×(ΔA_测÷ΔA_标)×V_反总÷(Cpr×V_样)÷T=1.75×(ΔA_测÷ΔA_标)÷Cpr

C_标：标准溶液浓度，10μmol/mL；V_反总：反应体系总体积，0.21mL；V_样：加入样本体积，0.06mL；V_样总：样本总体积，1mL；T：反应时间，20 min；W₁：酶干粉样本质量，mg；W₂：组织样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细菌或细胞总数，500万。

注意事项

1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。

3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。

5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。