糖代谢系列

β-木糖苷酶检测试剂盒

货号:PMK1192
规格:48T/96T
价格:1020元/1700元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析各种生物样品β-木糖苷酶的活性。其原理是β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在400nm处有特征吸收峰,测定400nm光吸收增加速率,可计算β-木糖苷酶活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

50mL

100mL

4℃保存

试剂一

0.5mL

1mL

4℃避光保存

试剂二

5mL

10mL

4℃保存

试剂三

5mL

10mL

4℃保存

标准品

1mL

1mL

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测400nm处的吸光度)及恒温箱

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

离心机制冰机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

提取液即用型;4℃保存。

试剂即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

试剂二即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存

标准品:标准品为5mM(μmol/mL)的对硝基苯酚溶液,使用前,平衡到室温;4℃保存

标准曲线设置:按下表所示,用去离子水将5μmol/mL标准品稀释为10.50.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156μmol/mL标准溶液 的标准溶液。


标准品体积(µL)

去离子水体积(µL)

标准品浓度(μmol/mL

标准品1

40µL of 5μmol/mL

160

1

标准品2

100µL of 标准品1 (1μmol/mL)

100

0.5

标准品3

100µL of 标准品2 (0.5μmol/mL)

100

0.25

标准品4

100µL of 标准品3 (0.25μmol/mL)

100

0.125

标准品5

100µL of 标准品4 (0.125μmol/mL)

100

0.0625

标准品6

100µL of 标准品5 (0.0625μmol/mL)

100

0.0313

标准品7

100µL of 标准品6 (0.0313μmol/mL)

100

0.0156

注意:每次实验,请使用新配制的标准品。

样本制备

植物组织:称取约0.1g样本,加入1mL提取液冰浴匀浆,10,000g,4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

细菌真菌收集500万细菌真菌到离心管内,用冷PBS清洗细胞,离心后弃上清,加入1mL提取液冰浴超声波破碎细菌真菌5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次10,000g,4℃离心10min,取上清液置冰上待测。

液体样本:直接测定,根据预实验确定稀释倍数。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。 如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上,调节波长到400nm,可见分光光度计去离子水调零。

2. 样本测定:在96孔板或微量玻璃比色皿中中依次加入下列试剂


标准μL)

空白μL)

测定(μL)

对照μL)

标准品 

40

0

0

0

去离子水

0

40

0

0

样本

0

0

40

40

试剂一

10

10

10

0

试剂二

70

70

70

80

混匀,45℃保温20min

试剂三

80

80

80

80

充分混匀,室温静置5min后, 400nm处测定吸光值A计算ΔA测定=A测定-A对照ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照,空白和标准曲线只需要测一次

注意:1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.005可适当加大样本量。如果A大于2.0,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数。

结果计算

1. 标准曲线的绘制:

以标准品浓度为y轴,ΔA标准x轴,绘制标准曲线(浓度为y轴更方便计算结果)。将ΔA测定带入方程计算出y值μmol/mL

2. 样本β-木糖苷酶活性计算

(1)按样本质量计算

单位的定义:45℃时g组织在反应体系中1min内催化产生1μmol对硝基苯酚为一个酶活单位U

β-木糖苷酶(U/g 质量)=(y×V反总)÷(W×V÷V样总)÷T=0.15×y÷W

(2)按液体样本体积计算

单位的定义:45℃时mL液体样本在反应体系中1min内催化产生1μmol对硝基苯酚为一个酶活单位U

β-木糖苷酶(U/mL)=(y×V反总)÷V÷T=0.15×y

(3)按细菌或真菌细胞数量计算

单位的定义:45℃时1万个细菌或真菌在反应体系中1min内催化产生1μmol对硝基苯酚为一个酶活单位U

 β-木糖苷酶(U/104 cell)= (y×V反总)÷(500×V÷V样总)÷T=0.0003×y

(4)按蛋白浓度计算

单位的定义:45℃时mg组织蛋白在反应体系中1min内催化产生1μmol对硝基苯酚为一个酶活单位U

β-木糖苷酶U/mg prot)=(y×V反总)÷(Cpr×V)÷T=0.15×y÷Cpr

V反总:反应体系总体积,0.12mL;V:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20minW:样本质量g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL500:细胞或细菌总数,500万。

结果展示

典型标准曲线

图片51图片52

                             图片26

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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