产品简介
β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在胃癌组织中含量丰富，测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法，用于分析各种生物样品中β-GD的活性。其原理是β-GD催化苯酚β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定产生酚酞的量来计算β-GD 酶活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 7.5mL | 15mL | 4℃保存 |
标准品 | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测540nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机、制冰机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
提取液：即用型；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：临用前加入2mL水，充分溶解待用；用不完的试剂分装-20℃保存。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准品：含1μmol/mL酚酞标准储备液，使用前，平衡到室温；4℃保存。
样本制备
动物组织：称取约0.1g样本，加入1mL提取液冰浴匀浆，8,000g，4℃离心10min，取上清液置冰上待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL提取液，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），8,000g，4℃离心10min，取上清液置冰上待测。
血清（浆）或培养液等液体样本:直接测定，根据预实验确定稀释倍数。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。 如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。提取液中含有蛋白成分，浓度为1mg/mL，如按蛋白浓度计算需扣除提取液本身的蛋白浓度。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定：在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂
测定（μL） | 标准（μL） | 空白（μL） | |
试剂一 | 20 | 20 | 20 |
试剂二 | 20 | 20 | 20 |
样本 | 10 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 10 | 0 |
去离子水 | 0 | 0 | 10 |
迅速混匀，放入37℃准确水浴30min | |||
试剂三 | 150 | 150 | 150 |
充分混匀， 540nm处测定吸光值A，计算ΔA测=A测定-A空白，ΔA标=A标准-A空白。空白和标准只需要测一次。
注意：1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA测大于1.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
样本β-GD活性计算
1.按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织在反应体系中每小时产生1μmol酚酞定义为一个酶活性单位U。
β-GD（U/g 鲜重）= C标×（ΔA测÷ΔA标）×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=10×（ΔA测÷ΔA标）÷W
2.按液体样本体积计算
单位的定义：每mL液体样本在反应体系中每小时产生1μmol酚酞定义为一个酶活性单位U。
β-GD（U/mL)＝C标×（ΔA测÷ΔA标）×V反总÷V样÷T=10×（ΔA测÷ΔA标）
3.按细菌或细胞数量计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每小时产生1μmol酚酞定义为一个酶活性单位U。
β-GD（U/104 cell)= C标×（ΔA测÷ΔA标）×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T=0.02×（ΔA测÷ΔA标）
4.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白在反应体系中每小时产生1μmol酚酞定义为一个酶活性单位U。
β-GD（U/mg prot）=C标×（ΔA测÷ΔA标）×V反总÷(Cpr×V样)÷T=10×（ΔA测÷ΔA标）÷Cpr
C标：标准品浓度，1μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.05mL；V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5h；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
