产品简介
多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物质之一。本试剂盒可检测各种生物样本中总多糖含量，其原理是利用水提醇沉法提取总多糖，苯酚-硫酸法测定总多糖含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
标准品 | 1 | 1 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测490nm处的吸光度）以及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机
无水乙醇、浓硫酸、去离子水
匀浆器
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准品：临用前加入1mL去离子水溶解，配制10mg/mL标准品 ；4℃保存。
标准曲线设置：用去离子水将10mg/mL标准品稀释为0.4，0.2，0.1，0.05，0.025，0.0125，0.00625mg/mL。
标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 浓度（mg/mL） | |
Std.1 | 40µL of 10mg/mL | 960 | 0.4 |
Std.2 | 500µL of 标准品1 (0.4mg/mL) | 500 | 0.2 |
Std.3 | 500µL of 标准品2 (0.2mg/mL) | 500 | 0.1 |
Std.4 | 500µL of 标准品3 (0.1mg/mL) | 500 | 0.05 |
Std.5 | 500µL of 标准品4 (0.05mg/mL) | 500 | 0.025 |
Std.6 | 500µL of 标准品5 (0.025mg/mL) | 500 | 0.0125 |
Std.7 | 500µL of 标准品6 (0.0125mg/mL) | 500 | 0.00625 |
样本制备
组织样本烘干粉碎，称取约0.05g样本，加入1mL去离子水，充分匀浆。100℃水浴提取2h（盖紧盖子防止水分流失），冷却后10000g室温离心10min，取上清。吸取0.2mL上清，慢慢加入0.8mL无水乙醇，混匀后4℃静置过夜，10000g室温离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL去离子水，充分混匀溶解沉淀。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到490nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表，在EP管中依次加入下列试剂：
空白管（µL） | 标准管（µL） | 测定管（µL） | |
样本 | 0 | 0 | 200 |
标准品 | 0 | 200 | 0 |
去离子水 | 200 | 0 | 0 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
浓硫酸 | 500 | 500 | 500 |
混匀后90℃水浴20min，流水冷却。取200µL至96孔板或微量玻璃比色皿中，于490nm下测定吸光值A。分别记为A空白，A标准和A测定，计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白
注意：1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.05可适当加大提取样本量，计算结果调整样本质量W。如果ΔA测大于2.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制：
以标准品浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线。将ΔA测定带入公式计算出y值（mg/mL）。
2. 样本总多糖含量计算
总多糖含量(μg/g干重)=y×V1÷（W×V2÷V3）×1000=1000×y÷W
V1：加入样本体积，0.2mL；V2：进行醇沉的体积，0.2mL；V3：提取时加入水的体积，1mL；W：样本质量，g；1000，mg到μg的换算系数。
结果展示
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
