产品简介
多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。本试剂盒可检测各种生物样本中总多糖含量,其原理是利用水提醇沉法提取总多糖,苯酚-硫酸法测定总多糖含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
标准品 | 1 | 1 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计(能测490nm处的吸光度)以及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机
无水乙醇、浓硫酸、去离子水
匀浆器
试剂准备
注意:各组分(小管试剂)开盖前,请先低速离心。
试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。
标准品:临用前加入1mL去离子水溶解,配制10mg/mL标准品 ;4℃保存。
标准曲线设置:用去离子水将10mg/mL标准品稀释为0.4,0.2,0.1,0.05,0.025,0.0125,0.00625mg/mL。
标准品体积(µL) | 去离子水体积(µL) | 浓度(mg/mL) | |
Std.1 | 40µL of 10mg/mL | 960 | 0.4 |
Std.2 | 500µL of 标准品1 (0.4mg/mL) | 500 | 0.2 |
Std.3 | 500µL of 标准品2 (0.2mg/mL) | 500 | 0.1 |
Std.4 | 500µL of 标准品3 (0.1mg/mL) | 500 | 0.05 |
Std.5 | 500µL of 标准品4 (0.05mg/mL) | 500 | 0.025 |
Std.6 | 500µL of 标准品5 (0.025mg/mL) | 500 | 0.0125 |
Std.7 | 500µL of 标准品6 (0.0125mg/mL) | 500 | 0.00625 |
样本制备
组织样本烘干粉碎,称取约0.05g样本,加入1mL去离子水,充分匀浆。100℃水浴提取2h(盖紧盖子防止水分流失),冷却后10000g室温离心10min,取上清。吸取0.2mL上清,慢慢加入0.8mL无水乙醇,混匀后4℃静置过夜,10000g室温离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL去离子水,充分混匀溶解沉淀。
注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上,调节波长到490nm,可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表,在EP管中依次加入下列试剂:
空白管(µL) | 标准管(µL) | 测定管(µL) | |
样本 | 0 | 0 | 200 |
标准品 | 0 | 200 | 0 |
去离子水 | 200 | 0 | 0 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
浓硫酸 | 500 | 500 | 500 |
混匀后90℃水浴20min,流水冷却。取200µL至96孔板或微量玻璃比色皿中,于490nm下测定吸光值A。分别记为A空白,A标准和A测定,计算ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白
注意:1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.05可适当加大提取样本量,计算结果调整样本质量W。如果ΔA测大于2.0,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制:
以标准品浓度为y轴,ΔA标准为x轴,绘制标准曲线。将ΔA测定带入公式计算出y值(mg/mL)。
2. 样本总多糖含量计算
总多糖含量(μg/g干重)=y×V1÷(W×V2÷V3)×1000=1000×y÷W
V1:加入样本体积,0.2mL;V2:进行醇沉的体积,0.2mL;V3:提取时加入水的体积,1mL;W:样本质量,g;1000,mg到μg的换算系数。
结果展示
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。