糖代谢系列

总多糖检测试剂盒

货号:PMK1198
规格:48T/96T
价格:510元/850元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐


产品简介

多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。试剂盒可检测各种生物样本中总糖含量,其原理是利用水提醇沉法提取总多糖,苯酚-硫酸法测定总多糖含量。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

试剂一

50mL

100mL

4℃保存

标准品

1

1

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计(能测490nm处的吸光度)以及水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

离心机

无水乙醇、浓硫酸、去离子水

匀浆器

试剂准备

注意:各组分(小管试剂)开盖前,请先低速离心。

试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

标准品:临用前加入1mL去离子水溶解,配制10mg/mL标准品 ;4℃保存。

标准曲线设置:用去离子水将10mg/mL标准品稀释为0.4,0.20.10.050.0250.01250.00625mg/mL。


标准品体积(µL)

去离子水体积(µL)

浓度(mg/mL)

Std.1

40µL of 10mg/mL

960

0.4

Std.2

500µL of 标准品1 (0.4mg/mL)

500

0.2

Std.3

500µL of 标准品2 (0.2mg/mL)

500

0.1

Std.4

500µL of 标准品3 (0.1mg/mL)

500

0.05

Std.5

500µL of 标准品4 (0.05mg/mL)

500

0.025

Std.6

500µL of 标准品5 (0.025mg/mL)

500

0.0125

Std.7

500µL of 标准品6 (0.0125mg/mL)

500

0.00625

样本制备

组织样本烘干粉碎,称取0.05g样本,加入1mL去离子水,充分匀浆。100℃水浴提取2h(盖紧盖子防止水分流失),冷却后10000g室温离心10min,取上清。吸取0.2mL上清,慢慢加入0.8mL无水乙醇,混匀后4℃静置过夜,10000g室温离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL去离子水,充分混匀溶解沉淀。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存6个月。

实验步骤

1. 酶标仪可见分光光度计预热30min以上,调节波长到490nm,可见分光光度计去离子水调零。

2. 操作表,在EP管中依次加入下列试剂:


空白管(µL

标准管(µL

测定管(µL

样本

0

0

200

标准品

0

200

0

去离子水

200

0

0

试剂

100

100

100

浓硫酸

500

500

500

混匀后90℃水浴20min,流水冷却。取200µL96孔板或微量玻璃比色皿490nm下测定吸光值A分别记为A空白A标准A测定,计算ΔA测定=A测定-A空白ΔA标准=A标准-A空白

注意:1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.05可适当加大提取样本量,计算结果调整样本质量W。如果ΔA大于2.0,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数。

结果计算

1. 标准曲线的绘制:

以标准品浓度为y轴,ΔA标准x轴,绘制标准曲线。将ΔA测定带入公式计算出y值(mg/mL)。

2. 样本总多糖含量计算

总多糖含量(μg/g干重)=y×V1÷(W×V2÷V3×1000=1000×y÷W

V1:加入样本体积,0.2mL;V2进行醇沉的体积0.2mL;V3提取时加入水的体积1mLW:样本质量,g1000,mg到μg的换算系数

结果展示

典型标准曲线

                                          







图片9 图片7

                                               图片8

                                              

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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