产品简介
植酸（Phytic acid），又名肌醇六磷酸、环己六醇六磷酸，它主要存在于植物的种子、根干和茎中，其中以豆科植物的种子、谷物的麸皮和胚芽中含量最高。植酸在植物发芽和生长过程中提供主要磷源，广泛存在于谷类、豆类、水果、蔬菜和干果等植物性食物中。另外，植酸作为螯合剂、抗氧化剂、保鲜剂、水的软化剂、发酵促进剂、金属防腐蚀剂等，广泛应用于食品、医药、油漆涂料、日用化工、金属加工、纺织工业、塑料工业及高分子工业等行业领域。 本试剂盒提供了一种简便的比色测定法，用于测定样本中的植酸含量。其原理是在一定的环境条件下，植酸酶可以分解植酸盐产生无机磷和肌醇衍生物，在酸性条件下，无机磷和钼酸铵显色剂发生反应，产生蓝色的钼蓝物质，其在700nm有特征吸收峰，通过测定无机磷的含量，可计算出植酸含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液一 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
提取液二 | 25mL | 50mL | 4℃保存 |
缓冲液 | 7.5mL | 15mL | 4℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
试剂二 | 7.5mL | 15mL | 4℃保存 |
显色剂 | 粉剂×2瓶 | 粉剂×4瓶 | 4℃保存 |
标准品（10μmol/mL 无机磷标准液） | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或分光光度计（能测700nm处的吸光度）及恒温箱/水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机、震荡仪
去离子水、浓硫酸
匀浆器/研钵、40目筛
试剂准备
提取液一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
提取液一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
缓冲液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：临用前每瓶加缓冲液3mL配制，现用现配。用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
显色剂：临用前每瓶加0.8mL去离子水溶解，再加3.2mL试剂二混匀，现用现配；当天用完。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将10μmol/mL标准品稀释为8、4、2、1、0.5、0.25、0.125 μmol/ mL的标准溶液。
标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（μmol/mL） | |
Std.1 | 800µL 10μmol/mL | 200 | 8 |
Std.2 | 100µL of Std.1 | 100 | 4 |
Std.3 | 100µL of Std.2 | 100 | 2 |
Std.4 | 100µL of Std.3 | 100 | 1 |
Std.5 | 100µL of Std.4 | 100 | 0.5 |
Std.6 | 100µL of Std.5 | 100 | 0.25 |
Std.7 | 100µL of Std.6 | 100 | 0.125 |
样本制备
新鲜植物样本：称取约 0.1g，加入1mL提取液一，充分匀浆后，常温震荡提取2h；8,000g，25℃离心10min，取上清0.5mL，加入0.5mL提取液二，混匀后4℃静置2h，4℃ 8,000g 离心 10min 后取上清待测。
干粉类植物样本：粉碎过40目筛，称取0.05g，加入1mL提取液一，充分匀浆后，常温震荡提取2h；8,000g，25℃离心10min，取上清0.5mL，加入0.5mL提取液二，混匀后4℃静置2h，4℃ 8,000g 离心 10min 后取上清待测。
液体样本：取 100μL 液体加入1mL 提取液一，充分混匀后，常温震荡提取2h；8,000g，25℃离心10min，取上清0.5mL，加入0.5mL试剂二，混匀后4℃静置2h，4℃ 8,000g 离心 10min 后取上清待测。
实验步骤
1. 酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长到700nm, 分光光度计去离子水调零。
2. 在EP管中依次加入下列试剂：
测定管（μL） | 对照管（μL） | 标准管（μL） | 空白管（μL） | |
样本 | 30 | 30 | 0 | 0 |
不同浓度标准品 | 0 | 0 | 30 | 0 |
去离子水 | 0 | 0 | 0 | 30 |
37℃孵育5min | ||||
缓冲液 | 0 | 120 | 120 | 120 |
试剂一 | 120 | 0 | 0 | 0 |
混匀，37℃孵育30min | ||||
95℃，10min终止反应，冷却至室温 | ||||
显色剂 | 150 | 150 | 150 | 150 |
混匀，37℃静置15min，10000g，室温，离心5min，取上清200µL，测定700nm处吸光值，计算ΔA测=A测定-A对照，ΔA标=A标准-A空白。（空白和标准曲线只需测一次，每个测定管需要设置一个对照管）
注意：为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果ΔA测过高（高于1.2）可用提取液稀释样本后再测定，计算结果时注意乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制
以标准液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
将 ΔA测 代入公式计算样本浓度（y，μmol/mL）。
1. 植酸含量计算
（1）按样本质量计算
植酸含量（μmol/g 质量）=y×V样÷（V样÷V样总×W)×2=2y÷W
（2）按照液体样本体积计算
植酸含量（μmol/mL）= y×V样÷V样×2=2y
V样：反应中样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
结果展示
典型标准曲线
1. 按样本质量计算
植酸含量（nmol/g 质量）= C标×（ΔA测÷ΔA标）=500×（ΔA测÷ΔA标）÷W
2. 按液体样本体积计算
植酸含量（nmol/mL）= C标×（ΔA测÷ΔA标）×V样÷（V样÷V样总×V液)×2=5000×（ΔA测÷ΔA标）
V样：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：样本处理后总体积，1mL；W：样本干重，g；V液：液体样本体积，0.1mL；2：样本处理时的稀释倍数，（0.5+0.5）/0.5=2。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
