其它系列

植酸检测试剂盒

货号:PMK1223
规格:48T/96T
价格:610元/1020元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

植酸(Phytic acid),又名肌醇六磷酸、环己六醇六磷酸,它主要存在于植物的种子、根干和茎中,其中以豆科植物的种子、谷物的麸皮和胚芽中含量最高。植酸在植物发芽和生长过程中提供主要磷源,广泛存在于谷类、豆类、水果、蔬菜和干果等植物性食物中。另外,植酸作为螯合剂、抗氧化剂、保鲜剂、水的软化剂、发酵促进剂、金属防腐蚀剂等,广泛应用于食品、医药、油漆涂料、日用化工、金属加工、纺织工业、塑料工业及高分子工业等行业领域。 本试剂盒提供了一种简便的比色测定法,用于测定样本中的植酸含量。其原理是在一定的环境条件下,植酸酶可以分解植酸产生无机磷和肌醇衍生物,在酸性条件下,无机磷和钼酸铵显色剂发生反应,产生蓝色的钼蓝物质,其在700nm有特征吸收峰,通过测定无机磷的含量,可计算出植酸含量

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

50mL

100mL

4℃保存

提取液二

25mL

50mL

4℃保存

缓冲液

7.5mL

15mL

4℃保存

试剂一

粉剂×1瓶

粉剂×2瓶

-20℃保存

试剂二

7.5mL

15mL

4℃保存

显色剂

粉剂×2

粉剂×4

4℃保存

标准品10μmol/mL 无机磷标准液

1mL

1mL

4℃保存

自备耗材

酶标仪或分光光度计(能测700nm处的吸光度)及恒温箱/水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

制冰机、低温离心机、震荡仪

去离子水浓硫酸

匀浆器/研钵40目筛

试剂准备

提取液即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

提取液即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

缓冲液即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一:临用前每瓶加缓冲液3mL配制现用现配用不完的试剂分装后-20℃保存,避免反复冻融

试剂二:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

显色剂:临用前每瓶0.8mL去离子水溶解,再加3.2mL试剂二混匀现用现配;当天用完。

标准曲线设置按下表所示用去离子水将10μmol/mL标准品稀释为8、4210.5、0.25、0.125 μmol/ mL的标准溶液。


标准品体积(µL)

去离子水体积(µL)

标准品浓度(μmol/mL

Std.1

800µL 10μmol/mL

200

8

Std.2

100µL of Std.1

100

4

Std.3

100µL of Std.2

100

2

Std.4

100µL of Std.3

100

1

Std.5

100µL of Std.4

100

0.5

Std.6

100µL of Std.5

100

0.25

Std.7

100µL of Std.6

100

0.125

样本制备

新鲜植物样本:称取约 0.1g,加入1mL提取液,充分匀浆后,常温震荡提取2h;8,000g,25℃离心10min,取上清0.5mL,加入0.5mL提取液二,混匀后4℃静置2h,4℃ 8,000g 离心 10min 后取上清待测。

干粉类植物样本粉碎过40目筛,称取0.05g,加入1mL提取液,充分匀浆后,常温震荡提取2h;8,000g,25℃离心10min,取上清0.5mL,加入0.5mL提取液二,混匀后4℃静置2h,4℃ 8,000g 离心 10min 后取上清待测。

液体样本:取 100μL 液体加入1mL 提取液一,充分混匀后,常温震荡提取2h;8,000g,25℃离心10min,取上清0.5mL,加入0.5mL试剂二,混匀后4℃静置2h,4℃ 8,000g 离心 10min 后取上清待测。

实验步骤

1. 酶标仪或分光光度计预热30min以上,调节波长到700nm, 分光光度计去离子水调零。

2. EP管中依次加入下列试剂:


测定管(μL)

对照管(μL)

标准管(μL)

空白管(μL)

样本

30

30

0

0

不同浓度标准品

0

0

30

0

去离子水

0

0

0

30

37℃孵育5min

缓冲液

0

120

120

120

试剂一

120

0

0

0

混匀,37℃孵育30min

95℃,10min终止反应,冷却至室温

显色剂

150

150

150

150

混匀,37℃静置15min,10000g,室温,离心5min,取上清200µL,测定700nm处吸光值,计算ΔA=A测定-A对照ΔA=A标准-A空白。(空白和标准曲线只需测一次,每个测定管需要设置一个对照管

注意:为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果ΔA过高(高于1.2)可用提取液稀释样本后再测定,计算结果时注意乘以稀释倍数。

结果计算   

1. 标准曲线的绘制

以标准液浓度为y轴,ΔAx轴,绘制标准曲线(浓度为y轴更方便计算结果)。

ΔA 代入公式计算样本浓度(y,μmol/mL)。

1. 植酸含量计算

(1)按样本质量计算  

植酸含量(μmol/g 质量)=y×V÷V÷V样总×W)×2=2y÷W

(2)按照液体样本体积计算  

 植酸含量(μmol/mL)= y×V÷V×2=2y

V:反应中样本体积,0.03mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g


结果展示

典型标准曲线              

图片71图片72

                                            图片3

1. 按样本质量计算

植酸含量(nmol/g 质量)= C×(ΔA÷ΔA=500×(ΔA÷ΔA÷W

2. 按液体样本体积计算

植酸含量(nmol/mL= C×(ΔA÷ΔA×V÷V÷V样总×V2=5000×(ΔA÷ΔA

 

V:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V样总样本处理后总体积,1mLW:样本干重,gV:液体样本体积,0.1mL;2:样本处理时的稀释倍数,(0.5+0.5)/0.5=2。         

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。

 


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