产品简介
锰过氧化物酶 (EC1.11.1.13) 是一种含铁血红素的过氧化物酶，其广泛存在于白腐担子真菌中，属于木质素降解酶系，是木质素起始降解的关键酶，能有效地降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物、叠氮化合物、 DTT、多环方烃等，在农业废弃物处理、生物降解、生物漂白、染料脱色等领域有较多的研究和应用。
本试剂盒提供了一种简单易用的比色法，用于分析样本中的锰过氧化物酶活性，其原理是锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。测定465nm处吸光度的变化可计算MnP活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 55mL | 110mL | 4℃保存 |
试剂二 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
试剂三 | 2mL | 4mL | 4℃避光保存 |
试剂四 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测465nm处的吸光值）及恒温培养箱或水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
台式离心机、制冰机
去离子水
试剂准备
试剂一：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂三：即用型；使用前平衡到室温；4℃避光保存。
试剂四：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
工作液配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三、试剂四按照每孔100μL：20μL：40μL：20μL的比例混匀（按需要检测的样本数量进行计算，可多配一些以防不够）；现配现用。
样本制备
组织：称取0.1g组织加入1mL预冷的试剂一冰浴匀浆，10,000g 4℃离心10min，取上清置于冰上待测。
细胞：收集5×106个细胞，用冷PBS清洗细胞后弃上清，加入1mL预冷的试剂一冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后4℃ 10,000 g离心10min，取上清置于冰上待测。
培养液或其它液体：直接检测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到465nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2. 工作液在25℃预热10min以上。
1. 样本测定：在96孔板或微量玻璃比色皿中加入20μL样本和180μL工作液，混匀，记录465nm下30s时吸光值A1和10min30s的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
结果计算
A. 用96孔板测定的计算公式如下：
1. 按照样本质量计算
酶活性单位定义：每g样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位U。
MnP活性（U/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷（V样÷V样总×W）÷T= 165×ΔA÷W
2. 按照细胞数量计算
酶活性单位定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位U。
MnP活性（U/104 cell）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷（V样÷V样总×500）÷T= 0.33×ΔA
3. 按照液体体积计算
酶活性单位定义：每mL液体样本每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位U。
MnP活性（U/mL）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T= 165×ΔA
4. 按照蛋白浓度计算
酶活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位U。
MnP活性（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=165×ΔA÷Cpr
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；109：1mol=1×109nmol；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10min；500：细菌或细胞总数，500万；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
B. 使用微量比色皿测定的计算公式
将上述计算公式中的光径d：0.5cm调整为d：1cm进行计算即可。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
