产品简介
高铁还原酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高价铁螯合物中的Fe3+还原为Fe2+，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法，用于测定样本中的FCR活性。其原理是FCR催化Fe3+还原为Fe2+，Fe2+和ferrozine反应显色，在562nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+增加的速率可测得高铁还原酶的活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 3mL | 6mL | 4℃，避光保存 |
试剂二 | 3mL | 6mL | 4℃，避光保存 |
试剂三 | 3mL | 6mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测 562nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
恒温箱或水浴锅、离心机、制冰机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
工作液配制：将试剂一、二、三以1:1:1的比例混合。临用前配制，用多少配多少。
样本制备
组织：称取0.1g组织，加入1mL预冷的去离子水，冰上匀浆。10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
细胞和细菌：收集5×106个细胞或细菌，用冷PBS清洗细胞或细菌后弃上清，加入1mL预冷的去离子水，冰上匀浆。10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。
血清、血浆或其它生物学液体：可直接测定，根据预实验确定稀释倍数。若溶液浑浊则离心取上清置于冰上待测。
实验步骤
1. 酶标仪或分光光度计预热30min以上，调节波长到562nm，分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定：在96孔板或微量玻璃比色皿中加入50μL样本上清和150μL工作液，混匀，记录初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。
注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA大于0.5，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数；如果ΔA小于0.001，可增加样本量进行检测。
结果计算
标准状态下测定的曲线回归方程为：y=8.0014x+0.0011，R2=0.9997；(x为标准品浓度，μmol/mL；y为吸光值ΔA)
1. 按样本质量计算
单位定义：每g样本在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U。
FCR（U/g）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=16.664×（△A-0.0011）÷W
2. 按液体体积计算
单位定义：每mL液体样本在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U。
FCR（U/mL）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V反总÷V样÷T=16.664×（△A-0.0011）
3. 按细胞数量计算
单位定义：每1万个细胞在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U。
FCR（U/104 Cells）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T=0.033×（△A-0.0011）
4. 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg蛋白在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U。
FCR（U/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V反总÷(Cpr×V样)÷T=16.664×（△A-0.0011）÷Cpr
V反总：反应体系体积，0.2mL；V样：加入样本体积0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；500：细胞总数，500万；1000，μmol到nmol的转换系数。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
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