其它系列

高铁还原酶(FCR)检测试剂盒

货号:PMK1231
规格:48T/96T
价格:960元/1600元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

高铁还原酶(ferric-chelate reductase, FCR)催化高价铁螯合物中的Fe3+还原为Fe2+,在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法,用于测定样本中的FCR活性。其原理是FCR催化Fe3+还原为Fe2+Fe2+ferrozine反应显色,在562nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+增加的速率可测得高铁还原酶的活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

试剂一

3mL

6mL

4,避光保存

试剂二

3mL

6mL

4,避光保存

试剂三

3mL

6mL

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计(能测 562nm处的吸光度)

 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

恒温箱或水浴锅、离心机、制冰机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

工作液配制:将试剂一、二、三以1:1:1的比例混合。临用前配制,用多少配多少。

样本制备

组织:称取0.1g组织,加入1mL预冷的去离子水冰上匀浆。10,000g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测

细胞和细菌:收集5×106个细胞或细菌,用冷PBS清洗细胞或细菌后弃上清,加入1mL预冷的去离子水冰上匀浆。10,000g,4℃离心10min,取上清液,置冰上待测  

血清、血浆其它生物学液体:直接测定,根据预实验确定稀释倍数若溶液浑浊则离心取上清置于冰上待测。

实验步骤

1. 酶标仪或分光光度计预热30min以上,调节波长到562nm,分光光度计去离子水调零。

2. 样本测定:在96孔板或微量玻璃比色皿加入50μL样本上清和150μL工作液,混匀,记录初始吸光值A130min后的吸光值A2ΔA=A2-A1

注意:实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验,如果ΔA大于0.5,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数;如果ΔA小于0.001,可增加样本量进行检测。

 

结果计算

标准状态下测定的曲线回归方程为:y=8.0014x+0.0011,R2=0.9997;(x为标准品浓度μmol/mL;y为吸光值ΔA)

1. 按样本质量计算

单位定义:每g样本在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U

FCR(U/g)=(△A-0.0011÷8.0014×1000×V反总÷(W×V÷V样总)÷T=16.664×(△A-0.0011)÷W

2. 按液体体积计算

单位定义:每mL液体样本在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U

FCR(U/mL)=(△A-0.0011÷8.0014×1000×V反总÷V÷T=16.664×(△A-0.0011)

3. 按细胞数量计算

单位定义:每1万个细胞在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U

FCRU/104 Cells=△A-0.0011÷8.0014×1000×V反总÷(500×V÷V样总)÷T=0.033×△A-0.0011)

4. 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每mg蛋白在反应体系中每分钟产生1nmolFe2+-ferrozine定义为一个酶活力单位U

FCR(U/mg prot)=(△A-0.0011÷8.0014×1000×V反总÷(Cpr×V)÷T=16.664×(△A-0.0011÷Cpr

 

V反总:反应体系体积,0.2mL;V:加入样本体积0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;500:细胞总数,500万1000,μmol到nmol的转换系数。

 


注意事项

1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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