产品简介
维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法，用于分析各种生物样品中维生素E含量。其原理是VE还原Fe3+为Fe2+，Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在510nm有特征吸收峰。通过测定510nm下吸光度变化来计算VE含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 1mL | 2mL | 4℃避光保存 |
试剂二 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
试剂三 | 3mL | 6mL | 4℃保存 |
试剂四 | 3mL | 6mL | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1支 | 粉剂×1支 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测510nm处的吸光度）及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机、漩涡震荡仪
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂四：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准品：含10mg维生素E，临用前加入1mL试剂三，配成10mg/mL 的标准液。溶解后的标准品可4℃保存1个月或-20℃长期保存。
标准曲线设置：取10µL 10mg/mL(即10,000µg/mL)标准品用990µL试剂三稀释至100µg/mL。用100µg/mL标准品按下表所示，进行下一步稀释为30、20、10、5、2、1、0.5µg/mL 的标准溶液。
100µg/mL标准品体积（µL） | 试剂三体积（µL） | 标准品浓度（µg/mL） | |
标准品1 | 120 | 280 | 30 |
标准品2 | 80 | 320 | 20 |
标准品3 | 40 | 360 | 10 |
标准品4 | 20 | 380 | 5 |
标准品5 | 8 | 392 | 2 |
标准品6 | 4 | 396 | 1 |
标准品7 | 2 | 398 | 0.5 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
组织：称取约0.1g，加入1mL提取液匀浆，在漩涡混匀仪上震荡5min，用提取液定至1mL。于25℃，5,000g离心10min，取上层测定。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），后在漩涡混匀仪上震荡5min，用提取液定至1mL。于25℃，5,000g离心10min，取上层测定。
液体样本：取0.1mL液体样本，加0.9mL提取液，漩涡仪混匀上震荡5min，于25℃，5,000g离心10min，取上层测定。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，可见分光光度计无水乙醇调零。
2. 样本测定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂）：
标准（μL） | 空白（μL） | 测定（μL） | 对照（μL） | |
样本 | 0 | 0 | 100 | 100 |
标准品 | 100 | 0 | 0 | 0 |
试剂一 | 20 | 20 | 20 | 20 |
试剂二 | 20 | 20 | 20 | 0 |
试剂三 | 0 | 100 | 0 | 20 |
充分混匀，25℃反应5min | ||||
试剂四 | 60 | 60 | 60 | 60 |
充分混匀，510nm处测定吸光值A，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照，空白和标准曲线只需要测一次。
注意：1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定小于0.005可适当加大样本量。若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制：
以标准品浓度为y轴，ΔA标准为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将ΔA测定带入方程计算出y值（µg/mL）。
2. 样本维生素E含量计算
（1）按样本质量计算：VE含量（μg/g）= y×V样÷（V样÷V样总×W）=y÷W
（2）按液体样本体积计算：VE含量（μg/mL）=y×V样÷（V样÷V样总×V液）=10y
（3）按细胞或细菌细胞数量计算：VE含量（μg/104 cell）=y×V样÷（V样÷V样总×细胞数量）=y÷500=0.002y
V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；V液：液体样本体积，0.1mL；细胞数量：以万为单位，500。
结果展示
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
