果胶系列

果胶酶检测试剂盒

货号:PMK1254
规格:48T/96T
价格:660元/1100元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

测定原理

果胶酶(pectinase)是分解果胶的酶类,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类, 广泛存在于高等植物果实和微生物中,是水果加工中最重要的酶。主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。试剂盒提供了一种简单的检测方法,检测样本中果胶酶活性其原理是果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

100mL×1

100mL×2瓶

4℃保存

试剂一

10mL

20mL

4℃保存

试剂二

粉剂×1

粉剂×2瓶

4℃保存

DNS试剂

10mL

20mL

4℃避光保存

标准品

粉剂×1支

粉剂×1支

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计(能测540nm处的吸光度)及水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

低温离心机、制冰机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

提取液:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂二:临用前每瓶加入7.5mL试剂一,50℃加热溶解,用不完的试剂4℃保存一周。

DNS试剂:即用型;使用前,平衡到室温;4℃避光保存。

标准品:10mg 半乳糖醛酸,使用时加入0.943mL 去离子水,配成 50μmol/mL 的标准贮备液。取10μL 50μmol/mL 的标准贮备液,加入90μL去离子水,充分混匀,配制成5μmol/mL标准液使用,现用现配。

样本制备

组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液,冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

细菌:收集500万细菌细胞加入1mL提取液,冰浴超声波破碎细胞3min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s);然后10000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。

细胞培养液等:直接检测。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上,调节波长到540nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2.  煮沸样本的准备:取200μL样本至新的EP管中,沸水浴5min,冷却至室温后,8000g 4℃离心 10min,取上清作为对照管的煮沸样本待测。

3. 操作表(EP管中按照如下方式加样):


空白μL)

标准μL)

测定μL)

对照管μL)

试剂二

120

120

120

120

50水浴5min

去离子水

30

0

0

0

标准液

0

30

0

0

样本

0

0

30

0

煮沸样本(沸水浴5min

0

0

0

30

混匀50水浴反应30min

DNS试剂

150

150

150

150

充分混匀,沸水浴5min,,冰浴冷却终止反应,8000g,4℃,离心10min,200μL96孔板或微量玻璃比色皿中测定540nm处吸光度,空白孔记为A,标准孔记为A,测定孔记为A。计算ΔA=A-AΔA=A-A空白管和标准管只需测定1次每个测定管需设一个对照管

注意:。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA大于1.0,样本可用提取液进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

结果计算

果胶酶活性的计算:

1.按样本质量计算

酶活定义:在50℃,pH3.5条件下,每克样本在反应体系中每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。

果胶酶活性(U/g 质量)= C×(ΔA÷ΔA×V反总÷(W×V÷V样总)÷T=50×(ΔA÷ΔA÷W

2.按照细菌数量计算

酶活定义:在50℃,pH3.5条件下,每104个细菌在反应体系中每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为1 个酶活力单位。

果胶酶活性(U/104 cell)=C×(ΔA÷ΔA×V反总÷(500×V÷V样总)÷T=0.1×(ΔA÷ΔA

3.按蛋白浓度计算

酶活定义:在50℃,pH3.5条件下,每毫克蛋白在反应体系中每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。

果胶酶活性(U/mg prot)=C×(ΔA÷ΔA×V反总÷(Cpr×V)÷T=50×(ΔA÷ΔA÷Cpr

4.按液体体积计算

酶活定义:在50℃,pH3.5条件下,每mL样本在反应体系中每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为1个酶活力单位。

果胶酶活性(U/mL)==C×(ΔA÷ΔA×V反总÷V÷T=50×(ΔA÷ΔA

C:标准液浓度,5μmol/mLV反总:反应体系总体积0.15mL;V:加入的样本体积,0.03mL;V样总加入提取液体积1mL;T:反应时间,0.5hW:样本质量,gCpr:样本蛋白浓度,mg/mL;500:细菌数量500万

 

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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