产品简介
血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。本试剂盒提供了一种简单、灵敏、快速的TIBC检测方法，其原理是Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe3+结合，剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+，此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关，酸化后，转铁蛋白结合的Fe3+释放，并且进一步被还原成Fe2+，此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关，A2减A1与TIBC浓度呈正比。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 15mL | 30mL | 4℃ |
试剂二 | 2.5mL | 5mL | 4℃避光保存 |
试剂三 A液 | 1.25mL | 2.5mL | 4℃避光保存 |
试剂三 B液 | 1.25mL | 2.5mL | 4℃避光保存 |
试剂四 | 3.5mL | 7mL | 4℃ |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测562nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
试剂准备
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂三：临用前配制；根据用量将试剂三 A液和试剂三 B液按 1:1 混合；4℃避光保存。
试剂四：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
样本制备
血清：直接测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到562nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在EP管中操作）：
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到562nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在EP管中操作）：
| 试剂 | 测定管（ul） |
| 血清 | 40 |
| 试剂一 | 280 |
| 试剂二 | 40 |
| 混匀，37℃孵育10min | |
| 试剂三 | 40 |
混匀，37℃孵育5min，取200μL到96孔板或微量玻璃比色皿在562nm处测吸光值，记为A1，测完后立即加入试剂四。 | |
| 试剂四 | 60 |
混匀后，37℃孵育5min，读取562nm处测吸光值，记为A2；计算ΔA=A2-A1。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA大于1.5，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
血清总铁结合力计算公式：
1. 标准曲线：y=0.6966×ΔA+0.0351(单位为μmol/mL）
2. 总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合Fe3+的μmol数。
总铁结合能力TIBC(μmol/L)=y×103×n=(696.6×ΔA+35.1)×n
103 ：1μmol/mL=1×103μmol/L；n：样本稀释倍数
