血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。本试剂盒提供了一种简单的比色法来检测血清样本中转铁蛋白所结合的铁其原理是亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 粉剂1瓶 | 粉剂2瓶 | 4℃ |
试剂二 | 粉剂1瓶 | 粉剂2瓶 | 4℃ |
标准品（1mM Fe3+标准液） | 1mL | 1mL | 4℃ |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测520nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机
去离子水、冰醋酸、氯仿
试剂准备
试剂一：临用前配制，取1瓶加入7.5mL 去离子水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用，可2-8℃保存一周。
试剂二：临用前配制，取1瓶依次加入235μL冰醋酸充分溶解，再加入7.5mL去离子水充分溶解，充分混 合。溶解后 2-8℃可保存一周。
标准品：临用前配制，取1mM Fe3+标准液0.1mL加入0.9mL去离子水，混匀，即得100μmol/L Fe3+标准液。
样本制备
血清：直接测定。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到520nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在EP管中操作）：
试剂（µL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
去离子水 | 125 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 125 | 0 |
血清样本 | 0 | 0 | 125 |
试剂一 | 125 | 125 | 125 |
试剂二 | 125 | 125 | 125 |
混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。 | |||
氯仿（自备） | 62 | 62 | 62 |
充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液200μL，加入96孔板或微量玻璃比色皿，测定520nm处吸光度值A空、A标、A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空
注意：空白孔只需测定1次。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测大于1.5，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
血清铁浓度计算公式：
血清铁含量(μmol/dL)=C标准×（ΔA测÷ΔA标）×V样÷V样=10×（ΔA测÷ΔA标）
C标准：100μmol/L Fe3+标准液；V样：加入样本体积，0.125mL；1L=10dL。
