产品简介
锌是必需的微量元素之一，在胰岛素和卟啉代谢中也起重要作用。本试剂盒提供了一种简单的检测方法，用于检测血清样本中锌的含量，其原理是在pH8.5-9.5的溶液中，Zn2+与锌试剂生成蓝色配位化合物，在620nm有最大吸收峰。在一定范围内620nm处吸光值与样品中锌的浓度成正比，测定620nm处吸光值即可计算样品中锌的浓度。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 10mL | 20mL | 4℃保存 |
试剂二 | 5mL | 10mL | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂1瓶 | 粉剂1瓶 | 4℃避光保存 |
标准品 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测620nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、水浴锅
去离子水、无水乙醇
试剂准备
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂三：使用前1天配制，48 T加入5 mL无水乙醇，96 T加入10 mL无水乙醇，充分溶解，盖紧，过夜待用。4℃保存可稳定约1个月，如颜色变黄，则已失效。
注意：试剂三应震荡溶解至少30min，若仍有少量颗粒不溶，并不影响实验。
标准曲线设置：按下表所示，用去离子水将标准品1mmol/L稀释为1000、500、200、100、50、20、10 µmol/L的标准溶液。
1 mmol/L标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（µmol/L） | |
Std.1 | 200 | 0 | 1000 |
Std.2 | 100 | 100 | 500 |
Std.3 | 40 | 160 | 200 |
Std.4 | 20 | 180 | 100 |
Std.5 | 10 | 190 | 50 |
Std.6 | 4 | 196 | 20 |
Std.7 | 2 | 198 | 10 |
样本制备
血清：直接检测。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到620nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在EP管中操作）：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | |
血清 | 0 | 0 | 100 |
标准品 | 0 | 100 | 0 |
去离子水 | 100 | 0 | 0 |
试剂一 | 200 | 200 | 200 |
混匀，室温，10,000rpm，离心10min | |||
上清 | 100 | 100 | 100 |
试剂二 | 100 | 100 | 100 |
试剂三 | 100 | 100 | 100 |
3. 混匀，室温静置10min，吸取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿，检测620nm处吸光值。空白孔记为A空，标准孔记为A标、测定孔记为A测。计算ΔA测=A测-A空，ΔA标=A标-A空。
注意：空白孔只需测定 1次。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。当ΔA测大于1.5时，建议将样本用去离子水稀释后测量。加入试剂三混匀后，要在30min内完成该管测定。
结果计算
标准曲线的绘制
1. 以标准溶液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（y轴为浓度更方便计算结果）。
2. 血锌浓度的计算
将样本的ΔA测带入方程得到y值（μmol/L）。
注意：若样本进一步稀释，则需要再乘以进一步稀释的稀释倍数n。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
ΔOD620
