产品简介
脂氧合酶（Lipoxygenase, LOX）是一种氧合酶，广泛存在于生物体内，如植物、动物、藻类、真菌、面包酵母、氰细菌等。LOX 催化不饱和脂肪酸氧化 反应，导致膜脂过氧化。LOX在植物的生长、发育、成熟、衰老和防御过程中具有重要作用。在动物中，LOX主要参与炎症反应重要调节分子如白三烯、前列腺素等的形成。本试剂盒可检测生物体内LOX活性，其原理是：LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在280nm处有特征吸收峰；测定280nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48 T | 96 T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
反应缓冲液 | 10mL | 20mL | 4℃保存 |
底物 | 1 | 1 | -20℃保存 |
自备耗材
酶标仪或紫外分光光度计（能测280nm处的吸光度）
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
提取液：即用型悬浊液，使用前需摇匀，平衡到室温；4℃保存。
反应缓冲液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
底物：48T在底物瓶中加入9mL反应缓冲液,96T在底物瓶中加入18mL反应缓冲液（振荡混匀1min）。用不完的试剂分装-20℃保存，避免反复冻融。
样本制备
动物组织：称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆，16,000g，4℃离心20min，取上清液，置冰上待测。
细胞或细菌：收集500万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL 提取液，冰浴超声波破碎细胞5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），然后16,000g，4℃离心20min，取上清液，置冰上待测。
实验步骤
1. 酶标仪或紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到280nm。紫外分光光度计去离子水调零。
2. 底物溶液25℃预热15min以上。
3. 在96孔UV微孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL样本和180μL底物溶液，迅速混匀后测定280nm处吸光值A，记录10s和70s的吸光值，分别记为 A1和A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：1.实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA大于1.0，样本可用提取液进一步稀释（计算结果乘以稀释倍数），或减少提取用样本量。
2. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。若反应后为明显的悬浊液，则需稀释后再测。
结果计算
A. 使用96孔板测定的计算公式
1. 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每mg蛋白在反应体系中每分钟催化吸光值变化0.005个单位为1个酶活单位。
LOX (U/mg prot)=ΔA×V反总÷0.005÷(Cpr×V样)÷T=2000×ΔA÷Cpr
2. 按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织在反应体系中每分钟催化吸光值变0.005个单位为1个酶活单位。
LOX (U/g 鲜重)==ΔA×V反总÷0.005÷(V样÷V样总×W)÷T=2000×ΔA÷W
3. 按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞在反应体系中每分钟催化吸光值变0.005个单位为1个酶活单位。
LOX (U/104 cells)==ΔA×V反总÷0.005÷(V样÷V样总×500)÷T=4×ΔA
B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式
1. 按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每mg蛋白在反应体系中每分钟催化吸光值变化0.01个单位为1个酶活单位。
LOX (U/mg prot)=ΔA×V反总÷0.01÷(Cpr×V样)÷T=1000×ΔA÷Cpr
2. 按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织在反应体系中每分钟催化吸光值变0.01个单位为1个酶活单位。
LOX (U/g 鲜重)==ΔA×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T=1000×ΔA÷W
3. 按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞在反应体系中每分钟催化吸光值变0.01个单位为1个酶活单位。
LOX (U/104 cells)==ΔA×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×500)÷T=2×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；V样：加入上清液体积，0.02 mL；T：反应时间，1 min；W：样品质量，g；V样总：提取液体积，1mL；500：细胞总数，500万。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
