产品简介
γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）是一种四碳非蛋白质组成的氨基酸，广泛存在于动植物和微生物体内。在植物体内，GABA 主要由谷氨酸脱羧酶催化 L-谷氨酸脱羧生成。 在哺乳动物脑内，GABA 是一种有效的抑制性神经递质，具有降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促进生长激素分泌和保肝利肾等作用，目前在医药和保健食品中 已有广泛的应用。本试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本中GABA的含量。其原理是苯酚和次氯酸钠与 GABA 反应，产生蓝绿色产物，在 640nm 有特征吸收峰；通过测定 640nm吸光度, 来计算GABA含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 3mL | 6mL | 4℃保存 |
试剂二 | 2.5mL | 5mL | 4℃避光保存 |
试剂三 | 4mL | 8mL | 4℃避光保存 |
试剂四 | 12.5mL | 25mL | 4℃保存 |
GABA标准品（10μmol/mL） | 1mL | 1mL | 4℃避光保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测640nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。
提取液：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂四：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
GABA标准品：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
样本制备
动植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL提取液，室温下充分匀浆，转移到 1.5mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于95℃水浴提取2h；冷却后，8,000g，室温离心 10min，取上清液待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL 提取液，室温超声波破碎 5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到 1.5mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于95℃水浴提取2h；冷却后，8,000g，室温离心 10min，取上清液待测。
细胞上清或血清（浆）等液体样本：在1.5mL EP管中，吸取 0.1mL液体加入1mL提取液，混匀，盖紧后（防止水分散失）置于95℃水浴提取2h；冷却后，8,000g，室温离心 10min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到640nm ，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
提取液 | 30 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 30 | 0 |
样本 | 0 | 0 | 30 |
试剂一 | 50 | 50 | 50 |
试剂二 | 40 | 40 | 40 |
混匀，室温静置5min | |||
试剂三 | 60 | 60 | 60 |
混匀，95℃水浴10min，冰浴冷却 | |||
试剂四 | 200 | 200 | 200 |
混匀，每管取200μL加入96孔板或微量玻璃比色皿对应的孔中，于640nm 测定吸光值，计算ΔA测=A测定-A空白、ΔA标=A标准-A空白（空白管和标准管只需做1次）。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA测定小于0.001可适当加大样本量，如果A测定大于0.4，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
（1）按样本质量计算
GABA含量(μmol/g 质量)=C标准品×V样×ΔA测÷ΔA标÷(V样÷V样总×W)×n=10×ΔA测÷ΔA标÷W×n
（2）按细菌或细胞数量计算
GABA含量(μmol/104 cell)=C标准品×V样×ΔA测÷ΔA标÷(500×V样本÷V样总)×n=0.02×ΔA测÷ΔA标×n
（3）按液体体积计算
GABA含量(μmol/mL)=C标准品×V样×ΔA测÷ΔA标÷(V样÷V样总×V液)×n=100×ΔA测÷ΔA标×n
C标准品：10μmol/mL；V样：加入样本体积：0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；n：样本进一步稀释的稀释倍数；500：细菌或细胞总数，500万个；V液：液体样本体积，0.1mL。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
