产品简介
丙三醇是无色味甜澄明黏稠液体。无臭。有暖甜味。俗称甘油。丙三醇是甘油三酯分子的骨架成分。当人体摄入食用脂肪时，其中的甘油三酯经过体内代谢分解，最终产物便是甘油和脂肪酸。另外，甘油可用作溶剂，润滑剂，药剂和甜味剂。本试剂盒可检测生物体内甘油含量，其原理是在碱性条件下，甘油可与铜离子生成铜络合物，在635nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与甘油含量成正比。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 6mL | 12mL | 4℃保存 |
试剂二 | 4mL | 8mL | 4℃保存 |
标准品（40mM甘油） | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测635nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
恒温箱、离心机
匀浆器（如果是组织样本）
去离子水
试剂准备
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
标准曲线设置：把200mM甘油标准品按下表所示，用去离子水进行下一步稀释。
标准品体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度（mM） | |
Std.1 | 200µL of 40mM | 0 | 40 |
Std.2 | 100µL of Std.1 (40mM) | 100 | 20 |
Std.3 | 100µL of Std.2 (20mM) | 100 | 10 |
Std.4 | 100µL of Std.3 (10mM) | 100 | 5 |
Std.5 | 100µL of Std.4 (5mM) | 100 | 2.5 |
Std.6 | 100µL of Std.5 (2.5mM) | 100 | 1.25 |
Std.7 | 100µL of Std.6 (1.25mM) | 100 | 0.625 |
注意：每次实验，请使用新稀释的标准品。
样本制备
动植物组织：称取约0.1g样本，加入1mL提取液匀浆，8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL提取液，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
血清（浆）等液体样本:取0.1ml液体样本，加入1mL提取液匀浆，8,000g，25℃离心10min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到635nm，可见分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | |
去离子水 | 100 | 0 | 0 |
不同浓度标准品 | 0 | 100 | 0 |
样本 | 0 | 0 | 100 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
试剂二 | 60 | 60 | 60 |
充分混匀，8,000g，25℃离心10min。每管取出200μL上清加入96孔板或微量玻璃比色皿中，于635nm测定吸光值，计算ΔA测=A测定-A空白、ΔA标=A标准-A空白（空白管只需做1 管）。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验，如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果A测定大于酶标仪检测范围，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线的绘制
以标准液浓度为y轴， ΔA标为x轴绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将ΔA测带入标准曲线公式计算出y（mM即μmol/mL）。
2. 样本甘油含量计算
（1）按液体体积计算
甘油含量（μmol/mL）=y×V样÷(V液×V样÷V样总)×n=10×y×n
（2）按样本质量计算
甘油含量（μmol/g 质量）=y×V样÷(W×V样÷V样总)×n=y÷W×n
（3）按细菌或细胞数量计算
甘油含量(μmol/104 cells)=y×V样÷(细胞数量×V样÷V样总)×n=y÷500×n=0.002×y×n
V样：加入样本体积，0.04mL；V样：液体样本体积，0.1mL；V样总：提取时加入去离子水体积，1mL；W：样本质量，g；；n：样本稀释倍数；500：细胞数量，500万。
结果展示
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
