产品简介
测定原理
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，不溶性果胶为原果胶。原果胶是不溶 于水的物质，但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶，在食品、纺织、印染、 烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。本试剂盒提供了一种简单的检测方法，可检测样本中原果胶含量，原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530nm处有特征吸收峰。通过测定530nm吸光度，从而计算出原果胶含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
提取液一 | 100mL×1瓶 | 100mL×2瓶 | 4℃保存 |
提取液二 | 50mL | 100mL | 4℃保存 |
试剂一 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
试剂二 | 1.5mL | 3mL | 4℃避光保存 |
标准品 | 粉剂×1支 | 粉剂×1支 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见分光光度计（能测530nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水、浓硫酸
匀浆器
试剂准备
提取液一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
提取液二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
标准品：10mg 半乳糖醛酸，使用时加入0.943mL 去离子水，配成 50μmol/mL 的标准贮备液。取10μL 50μmol/mL 的标准贮备液，加入90μL去离子水，充分混匀，配制成5μmol/mL标准液使用，现用现配。
样本制备
取0.1g样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴30min，冷却至室温，5000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入 1mL提取液一洗1遍（涡旋振荡2min左右，5000g 25℃离心10min，弃上清即可）。沉淀 中加入1mL蒸馏水，90℃水浴30min以溶解可溶性果胶和淀粉，冷却后，5000g 25℃离心10min，弃上清。所得沉淀即为粗细胞壁，加入1mL 提取液二置于 90℃恒温水浴锅中水解1h，取出冷却后于 8000g 25℃ 离心15min，取上清液待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存6个月。
实验步骤
1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上，调节波长到530nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2. 操作表（在EP管中按照如下方式加样）：
空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） | 对照管（μL） | |
样本 | 0 | 0 | 30 | 30 |
标准品 | 0 | 30 | 0 | 0 |
浓硫酸 | 180 | 180 | 180 | 180 |
混匀，90℃水浴10min，取出后冷却 | ||||
试剂一 | 0 | 0 | 0 | 30 |
试剂二 | 30 | 30 | 30 | 0 |
混匀25℃静置30min | ||||
去离子水 | 90 | 60 | 60 | 60 |
充分混匀，取200μL于到96孔板或微量玻璃比色皿中测定530nm处吸光度，空白孔记为A空，标准孔记为A标，测定孔记为A测。计算ΔA测=A测-A对，ΔA标=A标-A空（空白管和标准管只需测定1次）。
注意：。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA大于1.0，样本可用提取液二进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
结果计算
原果胶含量的计算
原果胶含量(μmol/g)=C标×（ΔA测÷ΔA标）÷（W÷V样总）=5×（ΔA测÷ΔA标）÷W
C标：标准液浓度，5μmol/mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
