产品简介:
蛋白印迹膜再生液,用于免疫印迹中转移了蛋白后膜的重复利用,可对同一张膜进行多次 Western Blot 检 测。在免疫印迹中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测表达量相对稳定的内参蛋 白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用蛋白印迹膜再生液中特殊成份解离一抗二抗与印迹膜上抗 原的结合,在不影响抗原蛋白的情况下从而去除一抗二抗,即可非常方便地重新利用同一张膜检测其它蛋白。与重新跑SDS-PAGE 胶比较,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
本产品采用酸性洗涤配方,不含有β-巯基乙醇等有机试剂,能快速有效的去除结合在印迹膜上的抗体,随后可使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验,因而可利用同一张膜进行多次蛋白检测,适用于少量样品多次检测不同的蛋白质。即使样品量并不匮乏,采用这一方法多次检测同一张膜上的蛋白,大大节约时间,而且可以消除重新上样带来的误差。
产品组成、储存、稳定性:
产品编号 | 名称 | 保存 | 规格 |
PMK0425B | 蛋白印迹膜再生液(酸性无气味型) | 室温 | 100ml/500ml |
操作步骤:
1)将发光后的膜在 TBST 中漂洗浸泡 5 分钟。
2)弃掉 TBST ,将膜完全浸入 20ml 的蛋白印迹膜再生液(酸性无气味型)中,摇床上轻摇 10-20 分钟。(对于很强的抗原抗体复合物,应该适当延长时间或者提高孵育温度,最佳条件应该实验中调整优化)
3)弃掉蛋白印迹膜再生液,使用 TBST 漂洗,摇床上轻摇 5 分钟,然后重复漂洗两次。
4)此时膜上抗体已除去,膜可以重新进行封闭和后续抗体孵育的 Western Blot 操作了。
注意事项:
1. 建议先检测表达量较低的目的蛋白,用洗脱液处理后检测表达量高的蛋白,如内参蛋白等。
2. 蛋白印迹膜再生液有轻度腐蚀性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。如果不小心溅入眼睛,请用大量清水冲洗。
3. 为了达到最佳效果,推荐使用 PVDF 膜,本产品对 PVDF 膜使用效果更好。
4. 适用于 ECL 和类似的化学发光试剂进行的 Western检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western检测,例如 DAB ,NBT/BCIP。
5. 需要再生的膜如果干了,则洗脱效率非常低,因此如果决定要做膜再生,应该做完底物化学发光后,立刻将湿润状态的膜放入 PBS 中 4℃保存直到开始再生过程,尽量避免让膜干燥。
6. 使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用 BSA 封闭的膜更容易再生。
7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。