糖代谢系列

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)检测试剂盒(微量法)

货号:货号:PMK1183
规格:48T/96T
价格:690元/1150元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其 他逆境条件下,可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA,因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析生物样品β-1,3-GA的活性。其原理是 β-1,3-GA 水解昆布多糖,内切 β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

提取液

50mL

100mL

4℃保存

试剂一

粉剂×1支

粉剂×1瓶

4℃保存

试剂二

15mL

30mL

室温避光保存

标准品

粉剂×1支

粉剂×1支

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测540nm处的吸光度)及水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

离心机制冰机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

提取液即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂一:临用前48T加入1mL去离子水,96T加入2mL去离子水;充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存。

试剂二即用型;室温避光保存若有黄色晶体析出,需90℃加热溶解后再用。

标准品:含10mg无水葡萄糖,临用前加入1mL去离子水溶解得10mg/mL标准品储液。10mg/mL标准品储液可4℃保存1个月或-20℃长期保存。取40µL10mg/mL标准品储液,加入360µL去离子水得到1mg/mL的标准溶液。

注意:每次实验,请使用新配制的标准溶液

样本制备

物组织:称取约0.1g样本,加入1mL提取液冰浴匀浆,12,000g,4℃离心10min,取上清液置冰上待测。

细胞或细菌:收集500万细胞或细菌到离心管内,用冷PBS清洗细胞,离心后弃上清,加入1mL提取液,超声波破碎细胞或细菌5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次12,000g,4℃离心10min,取上清液置冰上待测。

血清(浆)等液体样本:直接测定,根据预实验确定稀释倍数。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。 如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热30min以上,调节波长到540nm,可见分光光度计去离子水调零。

2. 样本测定:在1.5mLEP管中依次加入下列试剂


标准μL)

空白μL)

测定(μL)

对照μL)

样本

0

0

35

35

标准溶液

35

0

0

0

去离子

35

70

0

35

试剂一

0

0

35

0

充分混匀,放入37℃水浴60min

试剂

230

230

230

230

充分混匀,95℃水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中, 540nm处测定吸光值A,计算ΔA测定=A测定-A对照ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照,标准和空白只需要测一次

注意:1.实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA大于2.0,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数。

 

结果计算

1. 按样本质量计算

单位的定义:每g组织在反应体系中小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位U

β-1,3-GA(U/g 质量)=C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷(W×V÷V样总)÷T=2×(ΔA÷ΔA)÷W

2. 按液体样本体积计算

单位的定义:每mL液体样本在反应体系中小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位U

β-1,3-GA(U/mL)=C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷V÷T=2×(ΔA÷ΔA)

3. 按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中小时产生1mg还原糖定义为一个酶活力单位U

 β-1,3-GA(U/104 cell)= C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷(500×V÷V样总)÷T=0.004×(ΔA÷ΔA)

4. 按蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活力单位U

β-1,3-GAU/mg prot)=C×(ΔA÷ΔA)×V反总÷(Cpr×V)÷T=2×(ΔA÷ΔA)÷Cpr

C标准溶液浓度,1mg/mLV反总:反应体系总体积,0.07mL;W:样本质量,g;V:加入样本体积,0.035mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间1h;500:细胞或细菌总数,500万;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。 


注意事项

1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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