产品简介
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。本试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本中ATP的含量活性水平。其原理是肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸，可在660nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP含量。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 粉剂×1支 | 粉剂×1瓶 | 4℃保存 |
试剂二 | 0.75mL | 1.5mL | 4℃保存 |
试剂三 | 30uL | 60uL | -20℃保存 |
试剂四 | 2.5mL | 5mL | -20℃避光保存 |
试剂五 | 12.5mL | 25mL | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1支 | 粉剂×1支 | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测660nm处的吸光度）及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
试剂准备
试剂一：临用前48T加入1.25mL去离子水，96T加入 2.5mL 去离子水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂三：临用前用去离子水进行1:20 稀释，整个实验过程中，冰上避光放置。现用现配，用多少配多少；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂四：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃避光保存。
试剂五：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.2mL），按试剂四(mL)：试剂五（mL）=1：5的比例配制。用多少配多少。
标准品：临用前加入1mL去离子水得2umol/mL ATP标准液，4℃保存。
样本制备
血浆、血清等液体样本：取约 0.1mL液体样本，加入1mL去离子水充分混匀，100℃加热提取5min，4℃，8,000g离心15min，取上清，置冰上待测。
动植物组织样本：称取约0.1g样本，加入1mL去离子水匀浆，100℃加热提取5min，4℃，8,000g离心15min，取上清，置冰上待测。
细胞或细菌样本：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL去离子水，超声波破碎细胞或细菌5min（功率20％或200W，超声3s，间隔7s，重复30次）；然后4℃，8,000g离心15min，取上清，置冰上待测。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。处理好的样本须当天检测。
如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。
实验步骤
1.酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2.样本测定（在96孔板或微量玻璃比色皿中加入下列试剂）：
试剂 | 测定孔（μL） | 标准孔（μL） | 空白孔（μL） |
样本 | 10 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 10 | 0 |
试剂一 | 20 | 20 | 20 |
试剂二 | 10 | 10 | 10 |
试剂三 | 10 | 10 | 10 |
去离子水 | 0 | 0 | 10 |
| |||
显色剂 | 200 | 200 | 200 |
混匀，37℃水浴20min后，在660nm处，记录各管吸光值A，分别记为A测定、A标准、A空白。计算ΔA测=A测定-A空白，ΔA标=A标准-A空白。
注意：空白孔和标准孔只需测定一次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.001可适当加大样本量；如果ΔA测大于1.0或测定孔有明显浑浊，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
结果计算
ATP含量计算：
1.按样本鲜重计算
ATP含量(μmol/g鲜重)=C标×（ΔA测÷ΔA标）×V样÷(W×V样÷V提取)=2×（ΔA测÷ΔA标）÷W
2.按液体体积计算
ATP含量(μmol/mL)=C标×（ΔA测÷ΔA标）×V样÷(V液×V样÷V提取)=20×（ΔA测÷ΔA标）
3.按细菌或细胞数量计算
ATP含量(μmol/104 cell）=C标×（ΔA测÷ΔA标）×V样÷(500×V样÷V提取)=0.004×（ΔA测÷ΔA标）
4.按蛋白浓度计算
ATP含量(μmol/mg prot)=C标×（ΔA测÷ΔA标）×V样÷(V样÷Cpr）=2×（ΔA测÷ΔA标）÷Cpr
C标：标准液浓度，2μmol/mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V液：提取时加入液体样本体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
