氧化磷酸化系列

ATP检测试剂盒(微量法)

货号:PMK1874
规格:48T/96T
价格:380元/580元
库存:99
产品描述 常见问题 参考文献 相关产品推荐

产品简介

ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本中ATP的含量活性水平。其原理是肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸,可在660nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应ATP含量。

产品内容

试剂盒组分

规格

储存条件

48T

96T

试剂一

粉剂×1 

粉剂×1

4℃保存

试剂二

0.75mL

1.5mL

4℃保存

试剂三

30uL

60uL

-20℃保存

试剂四

2.5mL 

5mL

-20℃避光保存

试剂五

12.5mL 

25mL

4℃保存

标准品

粉剂×1 

粉剂×1 

4℃保存

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计(能测660nm处的吸光度)及水浴锅

96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头

制冰机、低温离心机

去离子水

匀浆器(如果是组织样本)

试剂准备

试剂一:临用前48T加入1.25mL去离子水,96T加入 2.5mL 去离子水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,避免反复冻融

试剂二:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

试剂三:临用前去离子水进行1:20 稀释,整个实验过程中,冰上避光放置。现用现配,用多少配多少;用不完的试剂分装后-20℃保存,避免反复冻融

试剂四:即用型;使用前,平衡到室温;-20℃避光保存。

试剂五:即用型;使用前,平衡到室温;4℃保存。

显色剂的配制:临用前请根据拟用显色剂体积(样本数×0.2mL),按试剂四(mL):试剂五(mL)=1:5的比例配制。用多少配多少。

标准用前加入1mL去离子水得2umol/mL ATP标准液,4℃保存。

样本制备

血浆、血清等液体样本:取约 0.1mL液体样本,加入1mL去离子水充分混匀,100℃加热提取5min,4℃,8,000g离心15min,取上清,置冰上待测。

动植物组织样本:称取约0.1g样本,加入1mL去离子水匀浆,100℃加热提取5min,48,000g离心15min,取上清,置冰上待测。

细胞或细菌样本:收集500万细胞或细菌到离心管内,用冷PBS清洗细胞,离心后弃上清,加入1mL去离子水,超声波破碎细胞或细菌5min(功率20%或200W,超声3s,间隔7s,重复30次);然后48,000g离心15min,取上清,置冰上待测。

注意:推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存1个月。处理好的样本须当天检测。

如需测定蛋白浓度,推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1.酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上,调节波长至660nm,可见光分光光度计去离子水调零。

2.样本测定(96孔板或微量玻璃比色皿加入下列试剂):

试剂

测定孔(μL)

标准孔(μL)

空白孔(μL)

样本

10

0

0

标准品

0

10

0

试剂一

20

20

20

试剂二

10

10

10

试剂三

10

10

10

去离子水

0

0

10

充分混匀,37℃准确水浴30min 

显色剂

200

200

200

混匀,37水浴20min后,660nm处,记录各管吸光值A,分别记为A测定AA计算ΔA=A测定-A空白ΔA=A标准-A空白

注意:空白孔和标准孔只需测定一次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于0.001可适当加大样本量如果ΔA大于1.0或测定孔有明显浑浊,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

结果计算

ATP含量计算:

1.按样本鲜重计算

ATP含量(μmol/g鲜重)=C×ΔA÷ΔA×V÷(W×V÷V提取)=2×ΔA÷ΔA÷W

2.按液体体积计算

ATP含量(μmol/mL)=C×ΔA÷ΔA×V÷(V×V÷V提取)=2ΔA÷ΔA

3.按细菌或细胞数量计算

ATP含量(μmol/104 cell)=C×ΔA÷ΔA×V÷(500×V÷V提取)=0.004×ΔA÷ΔA

4.按蛋白浓度计算

ATP含量(μmol/mg prot)=C×ΔA÷ΔA×V÷(V÷Cpr)=2×ΔA÷ΔA÷Cpr

C:标准液浓度,2μmol/mL;V:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V提取:加入提取液体积,1mL;V提取时加入液体样本体积0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。

注意事项

1. 实验过程中请穿实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。

3. 试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储

4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。

5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。


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