产品简介
S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法，用于分析土壤样本中的脲酶活性，其原理是利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 1mL（自备） | 2mL（自备） | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 11mL | 22mL | 4℃保存 |
试剂四A液 | 0.2mL | 0.4mL | 4℃，避光保存 |
试剂四B液 | 0.8mL | 1.6mL | 4℃保存 |
试剂五 | 1mL | 2mL | 4℃保存 |
标准品 | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测625nm处的吸光值）及恒温培养箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
台式离心机、30-50目筛
甲苯（不允许快递）、去离子水
试剂准备
注意：小管试剂开盖前，请先低速离心。
试剂一：甲苯，4℃保存；（自备）
试剂二：临用前48T加入4.5mL去离子水，96T加入9mL去离子水，充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存。
试剂三：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂四：临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周。
试剂五：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
标准品：含100μg/mL氮标准液。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将100μg/mL标准品稀释为 100、50、25、12,5、6.25、3.125、1.56μg/mL的标准溶液。
标准品体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（μg/mL） | |
Std.1 | 400µL 100μg/mL | 0 | 100 |
Std.2 | 200µL of Std.1 (100μg/mL) | 200 | 50 |
Std.3 | 200µL of Std.2 (50μg/mL) | 200 | 25 |
Std.4 | 200µL of Std.3 (25μg/mL) | 200 | 12.5 |
Std.5 | 200µL of Std.4 (12.5μg/mL) | 200 | 6.25 |
Std.6 | 200µL of Std.5 (6.25μg/mL) | 200 | 3.125 |
Std.7 | 200µL of Std.6 (3.125μg/mL) | 200 | 1.56 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30-50目筛。
测定步骤：
1. 培养
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一（μL） | 20 | 20 |
振荡混匀，使土壤全部湿润，室温放置15min | ||
试剂二（μL） | 90 | 0 |
去离子水（μL） | 0 | 90 |
试剂三（μL） | 190 | 190 |
混匀，放入37℃恒温培养箱培养24h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。
2. 将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL去离子水）。若最终计算得到的ΔA测仍大于1则继续稀释。
3. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到625nm，可见光分光光度计去离子水调零。
4. 测氨量（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂）：
试剂名称 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） |
稀释后的上清液 | 0 | 0 | 80 | 80 |
标准品 | 0 | 80 | 0 | 0 |
去离子水 | 80 | 0 | 0 | 0 |
试剂四 | 15 | 15 | 15 | 15 |
试剂五 | 15 | 15 | 15 | 15 |
充分混匀，室温放置20min | ||||
去离子水 | 90 | 90 | 90 | 90 |
充分混匀，在625nm处读取吸光值。空白孔记为A空，标准孔记为A标，测定孔记为A测，对照孔记为A对。计算ΔA测=A测-A对，ΔA标=A标-A空。每个测定需设一个对照，空白孔和标准曲线只需测定一次。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果ΔA测大于1.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以最终稀释倍数。
结果计算
1. 标准曲线绘制：
以标准溶液浓度（μg/mL）为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。
将∆A测代入公式计算出样本浓度y（μg/mL）。
2. 样本S-UE活性计算
单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
脲酶活性（U/g土样）=y×10×V反总÷W÷T=60×y
10：样本处理时的稀释倍数； V反总：反应体系总体积：0.3mL；T：反应时间，1d；W：样本质量，0.05g。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
