产品简介
S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。本试剂盒提供了一种简单的比色法来检测土壤纤维素酶（S-CL）。其原理是：采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量，可以反映S-CL活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 3mL | 6mL | 4℃保存 |
试剂二 | 20mL | 40mL | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃，避光保存 |
标准品（葡萄糖） | 10mg | 10mg | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测620nm处的吸光值）、烘箱、水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
台式离心机、振荡器、30-50目筛
甲苯、硫酸（不允许快递）、去离子水
试剂准备
试剂一：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂三：临用前48T加入2.5mL去离子水和22.5mL浓硫酸；96T加入5mL去离子水和45mL浓硫酸充分溶解待用。
标准品：含10mg无水葡萄糖，临用前加入1mL去离子水溶解。配制成10mg/mL标准溶液备用，4℃可保存1周，也可分装-20℃长期保存。
标准曲线设置：按下表所示用去离子水将10mg/mL标准溶液稀释为 0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的标准溶液。
标准品体积 | 去离子水体积 | 浓度 | |
Std.1 | 40µL 10mg/mL | 960µL | 0.4mg/mL |
Std.2 | 400µL of Std.1 (0.4mg/mL) | 400µL | 0.2mg/mL |
Std.3 | 400µL of Std.2 (0.2mg/mL) | 400µL | 0.1mg/mL |
Std.4 | 400µL of Std.3 (0.1mg/mL) | 400µL | 0.05mg/mL |
Std.5 | 400µL of Std.4 (0.05mg/mL) | 400µL | 0.025mg/mL |
Std.6 | 400µL of Std.5 (0.025mg/mL) | 400µL | 0.0125mg/mL |
Std.7 | 400µL of Std.6 (0.0125mg/mL) | 400µL | 0.00625mg/mL |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品。
样本制备
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30-50目筛。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到620nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2.样本测定（在EP管中加入下列试剂）：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
风干土样（g） | 0.05 | 0.05 | 0 | 0 |
甲苯（μL） | 50 | 50 | 0 | 0 |
振荡混匀15min | ||||
试剂一（μL） | 90 | 0 | 0 | 0 |
试剂二（μL） | 370 | 370 | 0 | 0 |
去离子水（μL） | 90 | 180 | 0 | 0 |
37℃振荡反应3h后，90℃水浴15min（盖紧，防止水分散失），冷却后8000g 25℃离心10min，取上清，得糖化液 | ||||
糖化液（μL） | 140 | 140 | 0 | 0 |
标准品（μL） | 0 | 0 | 140 | 0 |
去离子水（μL） | 0 | 0 | 0 | 140 |
试剂三（μL） | 260 | 260 | 260 | 260 |
混匀， 90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿，测定620nm处的吸光值。计算ΔA测=A测定-A对照，ΔA标=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照，标准曲线和空白只需要测一次。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.005可适当加大样本量。如果样本吸光值大于2.0，样本上清液可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少样本量。
结果计算
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为y轴，ΔA标为x轴，绘制标准曲线（浓度为y轴更方便计算结果）。将样本的ΔA测代入方程得到y值（mg/mL）。
2. S-NR活性计算：
单位的定义：每天每g土样在反应体系中产生1mg 葡萄糖的量为一个S-CL酶活力单位U。
S-CL活力（U/g土样）＝y×V反总÷W÷T=96×y
V反总：反应体系总体积，0.6mL；T：反应时间，3h=1/8d；W：样本质量，0.05g。
结果展示
典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
典型标准曲线
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
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