产品简介
S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。本试剂盒提供了一种检测蔗糖酶活性的便捷方法，其原理是S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一（甲苯） | 0.5mL（自备） | 1mL（自备） | 4℃保存 |
试剂二 | 3.75mL | 7.5mL | 4℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 11mL | 22mL | 常温避光保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测540nm处的吸光度）
水浴锅、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
甲苯、去离子水
试剂准备
试剂一：甲苯（自备）；4℃保存。
试剂二：即用型；使用前平衡到室温；4℃保存。
试剂三：临用前48T加入11mL去离子水，96T加入22mL去离子水充分溶解备用,4℃保存.
试剂四: 即用型；常温避光保存，若有黄色晶体析出，需 90℃加热溶解后再用。
样本制备
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过30-50目筛。
实验步骤
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2. 样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样（g） | 0.03 | 0.03 |
试剂一（μL） | 5 | 5 |
振荡混匀，使土样全部湿润，37℃水浴15min | ||
试剂二（μL） | 75 | 75 |
试剂三（μL） | 220 | |
去离子水（μL） | 220 | |
充分混匀，放入37℃水浴培养24小时，10000 g，4℃，离心5min，取上清液 | ||
上清液（μL） | 85 | 85 |
试剂四（μL） | 215 | 215 |
充分混匀，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却，去离子水稀释10倍（可以吸取100μL，加入900μL去离子水稀释；若吸光度超出酶标仪检测范围，可以加大稀释倍数），取200uL至微量比色皿或96孔板中540nm处读吸光值A。计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
结果计算
S-SC活性计算：
A. 用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 2.45x-0.062；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg 还原糖定义为一个S-SC活力单位U。
S-SC活力(mg/d/g土样)=(ΔA+0.062)÷2.45×10×V反总÷W÷T=40.8×(ΔA+0.062)
10：稀释倍数；T：反应时间，1d；V反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样品质量，0.03g。
B. 用微量比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y=4.9x-0.062；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg 还原糖定义为一个S-SC活力单位U。
S-SC活力(mg/d/g土样)=(ΔA+0.062)÷4.9×10×V反总÷W÷T =20.4×(ΔA+0.062)
10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样本质量，0.03g。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
5. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
