产品简介
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。本试剂盒提供了一种简单、快速的S-NP检测方法，其检测原理是中性环境中，S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-NP活性。
产品内容
试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 | |
48T | 96T | ||
试剂一 | 21mL | 42mL | 4℃避光保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 1.25mL | 2.5mL | 4℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1瓶 | 粉剂×1瓶 | 4℃避光保存 |
标准品（0.5μmol/mL苯酚标准液） | 1mL | 1mL | 4℃保存 |
自备耗材
酶标仪或可见光分光光度计（能测660nm处的吸光度）
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水、乙醇、甲苯
30-50目筛
试剂准备
注意：小管试剂开盖前，请先低速离心。
试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
试剂二：临用前48T加入50mL去离子水，96T加入100mL去离子水充分溶解；4℃保存。
试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
试剂四：临用前48T加入288μL无水乙醇（自备），12μL去离子水；96T加入576μL无水乙醇（自备），24μL去离子水充分溶解。（变褐色后不能再使用）。
标准品：含0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
样本制备
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30-50目筛。
实验步骤
催化反应：
称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
显色反应：
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，可见光分光光度计去离子水调零。
2. 按照下表在96孔板或微量玻璃比色皿中进行加样及反应：
空白（μL） | 标准（μL） | 测定（μL） | |
去离子水 | 10 | 0 | 0 |
标准品 | 0 | 10 | 0 |
样本 | 0 | 0 | 10 |
试剂三 | 20 | 20 | 20 |
试剂四 | 4 | 4 | 4 |
充分混匀 | |||
去离子水 | 166 | 166 | 166 |
混匀后25℃静置30min，于660nm测定吸光度，各孔的吸光度分别记为A空白，A标准，A测定，计算ΔA测=A测定-A空白照、ΔA标=A标准-A空白。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
结果计算
S-NP活性计算：
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1μmol酚为1个酶活单位U。
S-NP（U/g 土样）=C标×（ΔA测÷ΔA标）×V反总÷W÷T=0.725×（ΔA测÷ΔA标）÷W
C标：0.5μmol/mL；V反总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24h=1d。
注意事项
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
